基于三維組織培養(yǎng)的肺腺癌血清標志物的篩選和鑒定.pdf

1、肺癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率第一位的惡性腫瘤。晚期肺癌患者5年生存率低于10％，而早期肺癌患者經(jīng)過積極的治療，5年生存率可以達到80％以上。在目前醫(yī)療水平下，早診斷早治療是能夠顯著提高肺癌長期生存率的唯一辦法。由于肺癌患者發(fā)現(xiàn)癥狀時大都已經(jīng)進入中晚期，因此要在癥狀出現(xiàn)前就診斷肺癌只能依靠人群的篩查。血清學篩查是經(jīng)濟而簡便的手段，易為人所接受。盡管由于技術和方法學上的限制，目前血清學檢查在肺癌的診斷方面意義不大。但通過改進實驗方法，可能

2、會在肺癌血清標志物的研究上有新的進展。這不僅對于肺癌的診斷有重要意義，還可能找到新的肺癌治療靶點，對肺癌的治療也產(chǎn)生重要影響。本研究的目的就是篩選可能有意義的肺腺癌的血清標志物。 方法：本研究主要由三個部分構成。第一章是構建基于鼠尾膠原的三維培養(yǎng)平臺。使用光學顯微鏡、電子顯微鏡、免疫組織化學法和腫瘤移植來判斷在此平臺中的組織細胞的生長情況。第二章是采用差異蛋白質(zhì)組學技術來分析三維培養(yǎng)條件下肺腺癌和正常肺組織培養(yǎng)液中蛋白含量的差異

3、，對發(fā)現(xiàn)的差異蛋白使用MALDI-TOF-MS進行初步鑒定。第三章是對第二章中初步鑒定的差異蛋白質(zhì)進行WesternBlot的篩選，選取表達差異最大的蛋白質(zhì)為研究對象，采用ELISA檢測160例不同類型血清(來源包括肺腺癌患者、肺鱗癌患者、肺小細胞癌患者、肺良性腫瘤患者、其它部位惡性腫瘤患者和健康人)中目標蛋白的表達情況，初步了解它在肺腺癌診斷中的意義。 結果：在構建的以鼠尾膠原為基質(zhì)的三維培養(yǎng)模型中，肺腺癌組織和正常肺組織生長

4、良好。通過四次三個對照組的二維電泳共得到考染凝膠圖像12張和銀染凝膠圖像3張。得到的圖像重復性好，可比性高。采用PDquest軟件分析比較考染圖像，共發(fā)現(xiàn)差異蛋白點19個，鑒定出14個。同時鑒定11個表達無差異的牛屬蛋白質(zhì)。得到鑒定的差異蛋白中，目前發(fā)現(xiàn)與腫瘤相關的是磷酸丙糖異構酶、核苷二磷酸激酶A、膜聯(lián)蛋白A1、膜聯(lián)蛋白A2、凝集素-3、半胱天冬酶凋亡前銜接蛋白、銅鋅超氧化物歧化酶、谷胱甘肽-S-轉移酶P這八種。經(jīng)Western Bl

5、ot驗證，在二維電泳時發(fā)現(xiàn)的表達增高的六種差異蛋白質(zhì)中，僅有凝集素-3、半胱天冬酶凋亡前銜接蛋白、銅鋅超氧化物歧化酶在腺癌組織培養(yǎng)液上清和肺腺癌患者的血清中表達增高，以半胱天冬酶凋亡前銜接蛋白增高最為明顯。ELISA顯示半胱天冬酶凋亡前銜接蛋白在肺腺癌和肺鱗癌患者的血清中表達水平高于它在小細胞肺癌、肺良性腫瘤、其它腫瘤患者和健康人血清中的水平(p<0.05)。受試者操作特征曲線顯示在最大檢測效能時，PACAP檢測非小細胞肺癌(包括腺癌和

6、鱗癌)的敏感性和特異性分別為80.0％和57.3％。 結論：構建的基于鼠尾膠原的體外三維培養(yǎng)模型，可以很好地模擬肺腺癌組織和正常肺組織的體內(nèi)生長情況.有可能為相關研究提供簡便實用的研究平臺。將三維培養(yǎng)技術與蛋白質(zhì)組學技術結合起來篩選肺腺癌血清標志物是可行的。它也為其它腫瘤血清標志物的篩選提供了新的思路。肺腺癌和鱗癌患者血清中存在半胱天冬酶凋亡前銜接蛋白，且其濃度與小細胞肺癌患者、健康人、肺部良性腫瘤患者及其它部位腫瘤患者血清中此