肺腺癌四種腫瘤標志物的檢測及意義探討.pdf

1、目的： 探討腫瘤相關分子14-3-3σ、Akt、p27Kip1和p57Kip2蛋白在肺腺癌中的表達和臨床意義。 材料與方法： 收集中山大學腫瘤防治中心病理科1999年存檔的59例根治性手術切除的肺腺癌組織蠟塊；另外選取了10例肺良性病變組織蠟塊及16例癌旁正常肺組織石蠟標本。應用免疫組織化學技術(SABC法)檢測組織中14-3-3σ蛋白、Akt及磷酸化Akt(Phosphated-Akt，P-Akt)蛋白、p27

2、Kip1和p57Kip2蛋白的表達，結合臨床病理資料和隨訪資料，進行回顧性研究，并作出評價。 結果： (1)14-3-3σ蛋白陽性著色定位于細胞漿內，在59例肺腺癌組織中表達陽性52例，其中強陽性19例，表達陽性率為88％，顯著高于正常肺組織中表達(15/26，陽性率58％)，P＜0.01。14-3-3σ在肺腺癌中的過量表達與腫瘤的分化程度，淋巴結轉移，遠處轉移和TNM分期相關，P＜0.05。低分化的肺腺癌中14-3-3

3、σ蛋白表達陽性率高于中、高分化腫瘤；有淋巴結轉移、遠處轉移的肺腺癌患者中14-3-3σ的表達增多；14-3-3σ蛋白的表達且隨著臨床分期的增高而明顯增加。壽命表和單因素生存分析提示，14-3-3σ陽性表達者術后三年生存率和中位生存時間低于陰性表達者，P值小于0.05。Cox多重回歸模型分析的結果提示14-3-3σ蛋白表達增高，肺腺癌的預后愈差，結果說明14-3-3σ可作為肺腺癌判斷預后的獨立危險因素。 (2)肺腺癌中Akt蛋白在

4、細胞漿表達陽性，陽性著色主要在胞漿，部分可見于胞核，陽性率為88％，顯著高于正常肺組織23％，P值小于0.01；Akt的活化形式P-Akt蛋白，在肺腺癌中表達的陽性率為32％，也高于正常肺組織中表達(4％)，二者差異有顯著性，P＜0.01。Akt蛋白陽性表達與肺腺癌組織分化程度、淋巴結轉移和臨床分期顯著相關。腫瘤分化程度越低、臨床分期越高、有淋巴結轉移的患者，Akt蛋白的表達水平更高，P＜0.05；而P-Akt蛋白陽性表達除了與肺腺癌的

5、組織分化、淋巴結轉移、臨床分期有關外，還與遠處轉移呈正相關，P＜0.05。Akt蛋白陽性表達者和強陽性表達者，肺腺癌患者術后三年生存率為31.6％和0％、中位生存時間為20個月和8個月，低于陰性表達者三年生存率(50％)與中位生存時間(25個月)，P值小于0.05；P-Akt蛋白陽性表達者三年生存率為0％，中位生存時間為9個月，顯著低于陰性表達者(33％、21個月)，P＜0.05。Cox多重回歸模型分析表明P-Akt蛋白胞漿/核表達與預

6、后密切相關，是預測肺腺癌患者不良預后的獨立危險因素。 (3)p27Kip1蛋白在肺腺癌細胞核和/或細胞漿都有表達。胞核表達陽性率為37％，顯著低于正常肺組織胞核表達(81％)，P＜0.01；胞漿表達豐富，陽性率為81％，高于正常肺組織胞漿表達(38％)，P值小于0.05。p27Kip1蛋白胞核表達與胞漿表達的相關性分析，表明二者呈負相關，有統(tǒng)計學意義。此外，p27Kip1蛋白胞核表達與肺腺癌組織分化、淋巴結轉移、遠處轉移及臨床分

7、期呈負相關；而p27Kip1蛋白胞漿表達則與腫瘤細胞的分化程度、淋巴結轉移、臨床分期呈正相關。肺腺癌組織中p27Kip1蛋白胞核表達陰性者三年生存率為4％、中位生存時間為11個月，顯著低于胞核表達陽性者(53.3％、53個月)；p27Kip1胞漿表達的情況則相反。Cox多重回歸分析表明，p27Kip1可以作為一個獨立的評價腫瘤預后的指標，p27Kip1胞核水平越低預示著腫瘤預后越差。 (4)p57Kip2蛋白在肺腺癌組織中的胞核

8、表達陽性率為37％，明顯低于正常肺組織的陽性率85％，P＜0.01。本研究中p57Kip2蛋白胞核表達與肺腺癌的高、中、低分化顯著相關，分化程度越低的肺腺癌p57Kip2蛋白表達更低。但p57Kip2與腫瘤大小、肺腺癌組織類型、淋巴結轉移、遠處轉移以及臨床分期無關。肺腺癌組織中p57Kip2蛋白胞核表達陰性者三年生存率和中位生存時間分別為15.4％、13個月，高于表達陰性者(35.7％、25個月)，有統(tǒng)計學意義。Cox多因素回歸分析提示

9、，在肺腺癌中p57Kip2蛋白不能作為一個獨立的預后因素。此外，在肺腺癌組織中p57Kip2蛋白與p27Kip1蛋白類似，除了在細胞核表達外，在細胞漿也有表達。經(jīng)計數(shù)，胞漿中p57Kip2蛋白陽性率為64％，高于正常肺組織胞漿陽性率(35％)，差異有統(tǒng)計學意義。但p57Kip2蛋白胞核與胞漿中表達的相關性分析，沒有見到二者呈負相關，且無統(tǒng)計學意義。 (5)14-3-3σ、Akt及P-Akt以及p27Kip1、p57Kip2蛋白這

10、四種分子在肺腺癌組織中表達的相關性分析發(fā)現(xiàn)：P-Akt和Akt呈正相關，P＜0.05。P-Akt與p27Kip1胞核表達呈負相關，而與p27Kip1胞漿表達呈正相關；14-3-3σ蛋白與p27Kip1蛋白胞核、胞漿表達的關系與P-Akt類似。p27Kip1蛋白胞核表達與p57Kip2蛋白胞核表達呈正相關；但p57Kip2蛋白與Akt、P-Akt和14-3-3σ則無明顯相關。 討論： 本研究在59例肺腺癌組織和26例正常肺

11、組織中檢測了14-3-3σ、Akt及磷酸化(P-Akt)蛋白、細胞周期負調控因子p27Kip1和p57Kip2四種腫瘤相關分子的表達情況。研究發(fā)現(xiàn)，在肺腺癌組織中14-3-3σ蛋白過表達；Akt蛋白表達增高且過度活化；p27Kip1和p57Kip2在肺腺癌中陽性著色有兩種定位(胞核和/或胞漿)，其中胞核中的陽性表達較正常對照是顯著下降的，而胞漿中陽性表達則明顯增多。這四種分子在肺腺癌和正常肺組織中表達的差異，說明它們在肺腺癌的發(fā)生發(fā)展中

12、扮演著不同的角色。結合這四種腫瘤相關蛋白與肺腺癌的臨床病理指標的相關關系研究及壽命表和生存分析，提示我們，14-3-3σ蛋白過量表達、Akt蛋白表達增多和過度活化促進了肺腺癌的發(fā)生發(fā)展，是肺腺癌患者預后差的潛在因素；p27Kip1蛋白和p57Kip2蛋白作為腫瘤抑制因子，在肺腺癌組織中表達的異常定位(胞核表達減少，胞漿表達增多)，是肺腺癌患者預后不良的因素之一。多重回歸分析14-3-3σ、P-Akt、p27Kip1蛋白胞核表達以及腫瘤組

13、織分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移是判斷肺腺癌患者預后的獨立危險指標。 本研究對14-3-3σ、Akt及P-Akt蛋白、p27Kip1蛋白(胞核與胞漿)和p57Kip2蛋白(胞核與胞漿)在肺腺癌中表達的相關性分析提示，14-3-3σ蛋白和P-Akt蛋白與p27Kip1蛋白在胞核、胞漿中異常定位關系密切。結合14-3-3σ蛋白和P-Akt蛋白的背景知識，我們推測14-3-3σ蛋白和P-Akt蛋白可能通過調控p27Kip1蛋白從胞核泄

14、漏到胞漿，并滯留在胞漿，使p27Kip1蛋白不能發(fā)揮其在胞核中的抑瘤作用，進而促進了肺腺癌的發(fā)生發(fā)展，影響其生存預后。p57Kip2與p27Kip1是同一家族成員，在肺腺癌中的表達與p27Kip1蛋白類似，有胞核減少、胞漿增多的趨勢，但相關性分析表明其異常定位與14-3-3σ蛋白和P-Akt蛋白關系不明顯，p57Kip2蛋白在肺腺癌中的異常定位機制還有待進一步探討。下一步工作我們將在分子水平深入研究14-3-3σ、Akt和p27Kip1