巴戟天、葫蘆巴和補骨脂對去卵巢大鼠骨質疏松癥的作用及機理探討.pdf

1、目的：
　　 采用骨組織形態(tài)計量學的方法，觀察具有溫補腎陽作用的單味中藥-巴戟天、葫蘆巴和補骨脂，對去卵巢所致大鼠骨質疏松癥的作用，以篩選出對其具有預防作用的藥物;并從破骨細胞分化調控因子OPG/RANKL和對骨代謝具有重要調節(jié)作用的IL-1、IL-6的角度，初步闡明其作用機理，進一步為中醫(yī)藥治療骨質疏松癥提供實驗依據。
　　 方法：
　　 選用雌性Wistar大鼠83只，隨機分為3組:空白對照組12只，假手術組

2、12只，造模組59只。在術后1個月，將造模組大鼠隨機分為5組，即模型組、陽性對照組、巴戟天組和葫蘆巴組，每組各12只，補骨脂組11只。然后，開始灌胃給藥:各中藥組給予濃度為1g生藥/ml的水煎劑，給藥體積為5.6ml/kg體重，即給藥劑量均為5.6g生藥/kg體重;陽性對照組給予0.008mg/ml的己烯雌酚，給藥體積為5.6ml/kg體重。以上給藥1天1次，連續(xù)6天，休息1天后，如此給藥3個月?？瞻讓φ战M、假手術組、模型組按同法灌服等

3、體積的蒸餾水。
　　 各組大鼠于處死前15天和前3天分別腹腔注射鹽酸四環(huán)素30mg/kg體重，對骨進行熒光標記。給藥結束后，將大鼠以45mg/kg劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，股動脈取血，用于檢測外周血清中IL-1、IL-6的含量。然后，將各組大鼠處死，取右側脛骨制作不脫鈣骨切片，用于骨組織形態(tài)計量學指標的檢測;取左側脛骨制作冰凍切片，用于成骨細胞和骨髓基質細胞OPG和RANKL蛋白表達的檢測。
　　 統(tǒng)計學處理方法:實

4、驗結果皆以均數±標準差（(x)±s）表示，采用單因素方差分析（ANOVA）進行處理，組間兩兩比較，采用q檢驗。
　　 結果：
　　 1、巴戟天、葫蘆巴和補骨脂對去卵巢大鼠脛骨骨組織形態(tài)計量學指標的影響。
　　 1.1、巴戟天、葫蘆巴和補骨脂對去卵巢大鼠脛骨TBV％的影響。
　　 模型組大鼠脛骨TBV％較假手術組明顯降低。與模型組比較，巴戟天組、補骨脂組和陽性對照組的大鼠脛骨TBV％顯著增加;而葫蘆巴組則無

5、顯著性差異。巴戟天組、葫蘆巴組和補骨脂組大鼠脛骨TBV％明顯低于假手術組;陽性對照組較假手術組則無顯著性差異。結果見表1。
　　 1.2、巴戟天、葫蘆巴和補骨脂對去卵巢大鼠脛骨TRS％的影響。
　　 與假手術組相比，模型組大鼠脛骨TRS％明顯增高。巴戟天組、補骨脂組和陽性對照組較模型組大鼠脛骨TRS％明顯降低;葫蘆巴組較模型組無顯著性變化。巴戟天組、葫蘆巴組和補骨脂組大鼠脛骨TRS％較假手術組顯著增高;陽性對照組較假手術

6、組則無顯著性差異。結果見表2。
　　 1.3、巴戟天、葫蘆巴和補骨脂對去卵巢大鼠脛骨TFS％和MAR的影響。
　　 模型組大鼠脛骨TFS％和MAR均明顯高于假手術組。與模型組相比，巴戟天組、補骨脂組和陽性對照組大鼠脛骨TFS％和MAR顯著降低;葫蘆巴組無顯著性差異。與假手術組相比，巴戟天組、葫蘆巴組和補骨脂組大鼠脛骨TFS％均顯著增高;陽性對照組無明顯差異。巴戟天組、葫蘆巴組和補骨脂組大鼠脛骨MAR高于假手術組;陽性對照

7、組則無明顯差異。結果見表3。
　　 1.4、巴戟天、葫蘆巴和補骨脂對去卵巢大鼠脛骨mAR和OSW的影響。
　　 與假手術組相比，模型組大鼠脛骨mAR顯著升高。與模型組相比，陽性對照組大鼠脛骨mAR明顯降低;巴戟天組、葫蘆巴組和補骨脂組無明顯差異。葫蘆巴組和補骨脂組大鼠脛骨mAR明顯高于假手術組;巴戟天組和陽性對照組較假手術組無顯著性差異。
　　 與假手術組相比，模型組大鼠脛骨OSW顯著升高。與模型組相比，陽性對照

8、組大鼠脛骨OSW明顯降低;巴戟天組、葫蘆巴組和補骨脂組無明顯差異。葫蘆巴組OSW明顯高于假手術組;巴戟天組、補骨脂組和陽性對照組較假手術組無顯著性差異。結果見表4。
　　 2、巴戟天、葫蘆巴和補骨脂對去卵巢大鼠脛骨OB和MSC OPG和RANKL蛋白表達的影響
　　 2.1、巴戟天、葫蘆巴和補骨脂對去卵巢大鼠脛骨OB和MSC OPG蛋白表達的影響。
　　 與假手術組相比，模型組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞OPG

9、蛋白表達均明顯下調。與模型組相比，補骨脂組和陽性對照組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞OPG蛋白表達明顯上調;巴戟天組和葫蘆巴組無顯著差異。巴戟天組、葫蘆巴組和補骨脂組較假手術組明顯下調;陽性對照組與假手術組相比，無明顯差異。結果見表5。
　　 2.2、巴戟天、葫蘆巴和補骨脂對去卵巢大鼠脛骨OB和MSC RANKL蛋白表達的影響。
　　 模型組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞RANKL蛋白表達明顯高于假手術組。巴戟天組、補骨

10、脂組和陽性對照組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞RANKL蛋白表達較模型組顯著下調;葫蘆巴組無顯著性變化。與假手術組相比，葫蘆巴組大鼠脛骨成骨細胞RANKL蛋白表達上調;巴戟天組、葫蘆巴組和補骨脂組大鼠脛骨骨髓基質細胞RANKL蛋白表達上調;巴戟天組和補骨脂組大鼠脛骨成骨細胞RANKL蛋白表達較假手術組無顯著性差異。陽性對照組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞RANKL蛋白表達與假手術相比，均無明顯差異。結果見表6。
　　 3、巴戟天

11、、葫蘆巴和補骨脂對去卵巢大鼠外周血清中IL-1、IL-6含量的影響。
　　 與假手術組相比，模型組大鼠外周血清中IL-1含量顯著增高。與模型組相比，補骨脂組和陽性對照組大鼠外周血清中IL-1含量明顯降低;其它各給藥組則無顯著性變化。巴戟天組、葫蘆巴組以及補骨脂組大鼠外周血清中IL-1含量較假手術組均顯著升高;陽性對照組無明顯差異。
　　 模型組大鼠外周血清中IL-6含量高于假手術組。與模型組相比，巴戟天組、補骨脂組及陽性

12、對照組大鼠外周血清中IL-6含量較模型組明顯降低;葫蘆巴組則無顯著性差異。與假手術組相比，巴戟天組、葫蘆巴組以及補骨脂組大鼠外周血清中IL-6含量明顯增高;陽性對照組無明顯差異。結果見表7。
　　 結論：
　　 (1)巴戟天和補骨脂能在一定程度上抑制去除大鼠卵巢所致的骨的高轉換，阻止骨量丟失，對骨質疏松癥具有一定的預防作用;葫蘆巴對去卵巢所致的大鼠骨質疏松癥無明顯的預防作用。
　　 (2)補骨脂不僅能夠提高成骨細

13、胞和骨髓基質細胞OPG的蛋白表達，而且能抑制其RANKL的蛋白表達;此外，還可降低外周血中IL-1、IL-6的水平，從而達到對骨質疏松癥的預防作用。
　　 (3)巴戟天的作用途徑是通過降低成骨細胞和骨髓基質細胞RANKL的蛋白表達，使之與RANK的結合減少，進而抑制破骨細胞的分化、成熟及活性，防止骨的過度吸收，并對IL-6也有一定的抑制作用。
　　 (4)葫蘆巴對成骨細胞和骨髓基質細胞OPG和RANKL的蛋白表達以及IL