莜麥Permatin蛋白原核表達(dá)與抑制真菌作用的機(jī)制探究.pdf

1、類甜蛋白（TLP）屬于病程相關(guān)蛋白的第5家族，因其氨基酸序列與西非雨林中一種灌木(Thaumatococcus daniellii)果實(shí)中含有的甜蛋白高度同源而得名。目前類甜蛋白在昆蟲、真菌、植物等廣泛生物體中發(fā)現(xiàn)。類甜蛋白是一組富含半胱氨酸的蛋白質(zhì)，具有高度穩(wěn)定性。近年來，由于其抗真菌以及類脂聯(lián)素活性成為人們研究的熱點(diǎn)。permatin蛋白是莜麥中分離到的一種屬于病程相關(guān)蛋白家族5的蛋白。
　　本文將莜麥中分離到的編碼 perm

2、atin蛋白基因在原核中進(jìn)行重組表達(dá)與純化。將 permatin基因分別與編碼促溶性標(biāo)簽蛋白、周質(zhì)表達(dá)信號肽等基因融合，最終揭示只有與 NusA標(biāo)簽蛋白的融合表達(dá)才可實(shí)現(xiàn) permatin蛋白原核可溶性表達(dá)。
　　利用木霉、尖孢鐮刀菌、酵母探究 permatin蛋白的抑菌機(jī)理。通過帶毒平板法分別測定了 permatin蛋白對木霉和尖孢鐮刀菌的半抑制濃度；接著利用Delta vision顯微鏡觀察了蛋白對木霉孢子萌發(fā)及菌絲生長的影響

3、，并對孢子萌發(fā)的影響進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；進(jìn)一步結(jié)合碘化丙啶染色探究蛋白對真菌菌絲及孢子通透性以及活性氧含量的影響。結(jié)果顯示 permatin蛋白對木霉和尖孢鐮刀菌半抑制濃度分別為0.73μM，21.42μM；能夠顯著的抑制木霉孢子的萌發(fā)及菌絲的生長，增加真菌菌絲及孢子細(xì)胞膜的通透性，導(dǎo)致尖孢鐮刀菌菌絲內(nèi)活性氧的集聚。采用釀酒酵母為實(shí)驗(yàn)材料通過液體懸浮培養(yǎng)法，繪制不同處理組生長曲線法，結(jié)合核酸染料DAPI及熒光顯微鏡觀察法，利用DCFH-DA（2'