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文檔簡介
1、禽白血病(Avian Leukosis,簡稱AL)是由禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,簡稱ALV)感染引起的禽類各組織和臟器腫瘤。ALV現(xiàn)已分至A~K11個亞群,A、B、C、D、E、J和K亞群分離自雞。A~D和J、K亞群為外源性病毒,而E亞群是內(nèi)源性禽白血病病毒,在許多品系雞體內(nèi)極普遍存在,低致病性或無致病性。
為了建立禽白血病檢測和凈化規(guī)范,本研究開展了禽白血病群標(biāo)準(zhǔn)抗原、J和A亞群禽白血病標(biāo)準(zhǔn)抗原候
2、選物和禽白血病群特異性標(biāo)準(zhǔn)單抗、J亞群禽白血病特異性標(biāo)準(zhǔn)單抗、J和A亞群禽白血病特異性標(biāo)準(zhǔn)血清候選物的研究,并以此作為生物學(xué)材料,對市場上相關(guān)試劑盒進行了檢驗,獲得良好效果,為進一步凈化禽白血病奠定了基礎(chǔ)。
一、禽白血病群標(biāo)準(zhǔn)抗原、J和A亞群禽白血病標(biāo)準(zhǔn)抗原候選物的研制
p27基因是禽白血病病毒A、B、C、D、J亞群和K亞群共同的高度保守的基因。本研究用表達禽白血病群特異性抗原GST-p27蛋白的pGEX-6p-1-
3、p27重組菌進行誘導(dǎo)表達,對表達產(chǎn)物GST-p27進行了純化,制備了ALV的重組GST-p27融合蛋白;同時擴增了J亞群禽白血病病毒JS09GY07株、A亞群禽白血病病毒AH10株;對這些候選物質(zhì)進行了ELISA、PCR及IFA鑒定,同時通過一系列純粹性、蛋白濃度、TCID50等標(biāo)定,然后經(jīng)過分裝、物理性狀檢測及裝量差異系數(shù)分析、細菌及支原體感染情況鑒定、均一性、穩(wěn)定性以及保存時間的標(biāo)定,分別制備出了禽白血病群標(biāo)準(zhǔn)抗原、J和A亞群禽白血
4、病標(biāo)準(zhǔn)抗原候選物及其對應(yīng)的弱陽性及陰性抗原,利用這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對市場上用于檢測禽白血病群特異性抗原p27的試劑盒進行檢驗,發(fā)現(xiàn)市場上的試劑盒良莠不齊,提示在進行禽白血病檢測及凈化工作中選擇市場上相應(yīng)的試劑盒時應(yīng)予以足夠重視。
二、禽白血病群特異性標(biāo)準(zhǔn)單抗、J亞群禽白血病特異性標(biāo)準(zhǔn)單抗、J和A亞群禽白血病特異性標(biāo)準(zhǔn)血清候選物的研制
本研究分別復(fù)蘇并擴增了針對禽白血病群特異性抗原p27蛋白的特異性單克隆抗體ALVp27-5
5、D3雜交瘤細胞株及針對J亞群禽白血病特異性抗原gp85蛋白的單克隆抗體細胞株JE9,并分別將狀態(tài)好的ALVp27-5D3雜交瘤細胞和JE9雜交瘤細胞腹腔注射6~8周齡的Balb/c雌性小鼠,大量制備ALVp27-5D3及JE9單克隆抗體腹水,并進行了純化,制備了禽白血病群特異性標(biāo)準(zhǔn)單抗、J亞群禽白血病特異性標(biāo)準(zhǔn)單抗候選物。
用ALV-J通過肌肉注射途徑對SPF雞進行攻毒,五免十二天采血分離血清,作為J亞群禽白血病特異性標(biāo)準(zhǔn)血清
6、候選物。用ALV-A通過腹腔注射、滴鼻點眼途徑對SPF雞進行攻毒,二免十二天采血分離血清,作為A亞群禽白血病特異性標(biāo)準(zhǔn)血清候選物。
應(yīng)用IFA、ELISA、Western blot等對制備好的禽白血病群特異性標(biāo)準(zhǔn)單抗、J亞群禽白血病特異性標(biāo)準(zhǔn)單抗、J和A亞群禽白血病特異性標(biāo)準(zhǔn)血清候選物進行標(biāo)定,然后進行分裝、物理性狀檢測及裝量差異系數(shù)分析,細菌及支原體感染、均一性、穩(wěn)定性以及保存時間等一系列標(biāo)定,最終獲得了抗ALV-J和ALV
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