TGF-β3和DPSCs在兔面神經(jīng)損傷修復(fù)中的病理觀察.pdf

1、目的：以成年健康新西蘭大白兔建立面神經(jīng)上頰支橫斷損傷模型，探討再生室內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用牙髓干細(xì)胞和TGF-β3修復(fù)兔面神經(jīng)橫斷性損傷的可行性，比較相同濃度不同時(shí)間段面神經(jīng)的恢復(fù)情況，為面神經(jīng)損傷的臨床治療提供可靠依據(jù)。
　　方法：選用清潔級(jí)健康成年新西蘭大白兔48只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照1、對(duì)照2、空白組，每組12只，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組建立面神經(jīng)上頰支橫斷傷模型，離斷的神經(jīng)兩斷端用硅膠管再生室橋接，試驗(yàn)組：再生室內(nèi)注入100ng/μl TGF

2、-β3液10μl和1×108/LDPSCs懸液0.1ml；對(duì)照1：加入同樣量的TGF-β3液；對(duì)照2：加同樣量的PBS液；空白組不作任何處理.術(shù)后肌注青霉素鈉三日，每天觀察觸須拂動(dòng)恢復(fù)情況。分別與術(shù)后1周，4周，12周處死動(dòng)物制備面神經(jīng)標(biāo)本，進(jìn)行大體觀察、透射電鏡觀測(cè)、組織學(xué)觀測(cè)及圖像分析來評(píng)價(jià)神經(jīng)再生恢復(fù)情況。
　　結(jié)果：48只模型全部進(jìn)入結(jié)果分析，1）大體形態(tài)觀察，與對(duì)照組相比較,實(shí)驗(yàn)組再生神經(jīng)恢復(fù)良好，其外膜血管豐富,神經(jīng)直

3、徑與近遠(yuǎn)端相當(dāng)，再生神經(jīng)韌性好；2）HE染色：實(shí)驗(yàn)組新生的神經(jīng)纖維較多，神經(jīng)束大小不均，束間血管多，神經(jīng)纖維髓鞘化程度高，且厚度增大，軸突直徑也有所增大；對(duì)照組1瘢痕組織較多，新生纖維較實(shí)驗(yàn)組少，已有少量髓鞘化，新生纖維排列不齊，有扭曲；對(duì)照組2可見少量新生纖維及脂肪細(xì)胞浸潤(rùn)，新生纖維軸突分布不均且數(shù)量少，神經(jīng)纖維不連續(xù)，盤旋扭曲，瘢痕組織較多。3）電鏡觀察見實(shí)驗(yàn)組的再生纖維形態(tài)規(guī)則、髓鞘板層結(jié)構(gòu)清晰且多為有髓纖維，軸漿內(nèi)含有豐富的細(xì)胞

4、器；對(duì)照組1神經(jīng)纖維形態(tài)較規(guī)則但髓鞘發(fā)育欠佳，軸漿內(nèi)也含有相當(dāng)數(shù)量的細(xì)胞器；對(duì)照組2可見變性的神經(jīng)纖維，有髓神經(jīng)纖維形態(tài)不規(guī)則，髓鞘發(fā)育不良結(jié)構(gòu)紊亂；4）圖像分析：實(shí)驗(yàn)組再生神經(jīng)纖維總數(shù)多于兩個(gè)對(duì)照組，對(duì)照組1多于對(duì)照組2,差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）；實(shí)驗(yàn)組再生神經(jīng)纖維直徑大于其它兩個(gè)各對(duì)照組，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05），對(duì)照組1與對(duì)照組2比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）;12周組與4周組的神經(jīng)纖維總數(shù)和纖維直徑比較中，

5、12周組均優(yōu)于4周組，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。5）免疫組化結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中均出現(xiàn)GFAP陽性細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組最多，對(duì)照組1其次，對(duì)照組2最少，差異隨恢復(fù)時(shí)間延長(zhǎng)差異逐漸減?。籗100蛋白在胞漿呈強(qiáng)陽性表達(dá)，髓鞘弱陽性表達(dá)，術(shù)后12周，實(shí)驗(yàn)組再生神經(jīng)染色陽性表達(dá)率高，神經(jīng)纖維排列整齊形態(tài)規(guī)則，對(duì)照組陽性表達(dá)率低,纖維扭曲明顯。
　　結(jié)論：（1）TGF-β3與牙髓干細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用可有效促進(jìn)面神經(jīng)再生，二者聯(lián)合應(yīng)用比單獨(dú)應(yīng)