不同劑量ICS-LABA聯(lián)合川芎嗪對(duì)慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道重塑及SLPI影響的研究.pdf

1、目的: 采用香煙煙熏加氣道內(nèi)滴注內(nèi)毒素(LPS)法復(fù)制慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型，通過不同劑量沙美特羅丙酸氟替卡硹(ICS/LABA)及聯(lián)合川芎嗪的干預(yù)，觀察肺功能、肺組織病理改變、氣管壁和平滑肌增厚情況及肺組織中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)，分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制劑(SLPI)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達(dá)及血中CD4/CD8的變化，，探討不同劑量ICS/LABA聯(lián)合川芎嗪對(duì)COPD大鼠氣道重塑和SLPI的干

2、預(yù)作用及其可能機(jī)制。
　　方法: 70只Wistar雄性大鼠隨機(jī)分成為對(duì)照組(A組)、模型組（B組）、川芎嗪組（C組）、中劑量ICS/LABA組（D組）、中劑量ICS/LABA聯(lián)合川芎嗪組（E組）、高劑量ICS/LABA組（F組）、高劑量ICS/LABA聯(lián)合川芎嗪組（G組），每組10只。采用香煙煙熏加氣管內(nèi)注入LPS法復(fù)制COPD大鼠模型。干預(yù)組吸入ICS/LABA中、高2個(gè)劑量及鹽酸川芎嗪腹腔注射干預(yù)30天。觀察大鼠臨床表現(xiàn)，檢

3、測各組大鼠肺功能，劉氏染色測定肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞計(jì)數(shù)及肺組織病理形態(tài)學(xué)變化，圖像分析測量小氣道平滑肌和管壁厚度，雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)檢測BALF中TGF-β1表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)測定血中CD4、CD8值，免疫組化法測定肺組織中MMP-9、SLPI的表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測肺組織中MMP-9mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果: 1.大鼠一般狀況模型組大鼠活動(dòng)減少，毛發(fā)干枯，口唇及四肢紫

4、紺，行動(dòng)遲滯，出現(xiàn)明顯喘息，呼吸加深加快及腹肌抽搐等呼吸困難表現(xiàn);對(duì)照組表現(xiàn)正常，毛色光澤，活動(dòng)敏捷，口唇及爪色淡紅;經(jīng)ICS/LABA及川芎嗪干預(yù)后，C、D、E、F、G組上述癥狀均有所減輕，以G組明顯(P＜0.05)。2.各組大鼠肺功能結(jié)果:模型組峰值呼氣流速(PEF)（21.50±1.78）、FEV0.3/FVC（65.27±6.58）與對(duì)照組[(41.88±3.26)、(89.63±5.42)]相比，差異明顯(P＜0.05);經(jīng)I

5、CS/LABA及川芎嗪干預(yù)后，C、D、E、F、G組PEF分別為（25.82±1.96）、（30.62±2.31）、(35.32±2.18)、（33.13±2.62）、(40.12±3.01)， FEV0.3/FVC分別為（67.36±4.52）、（80.00±4.56）、(84.80±4.61)、（82.34±5.07）、(87.62±4.76)較模型組明顯增高(P＜0.05)，以G組明顯(P＜0.05)。3.BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果:模

6、型組細(xì)胞總數(shù)（14.82±0.96）及中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為(30.17±9.28)、(12.36±4.27)、(55.87±5.49)較對(duì)照組[(9.35±0.62)、（18.42±6.37）、（15.79±3.56）、(74.63±6.71)]細(xì)胞總數(shù)明顯升高(P＜0.05)，而淋巴細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞則顯著降低（P＜0.05）;經(jīng)ICS/LABA及川芎嗪干預(yù)后，C、D、E、F、G組BALF中細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞

7、、淋巴細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)模型組顯著減少(P＜0.05)，以G組明顯(P＜0.05)。4.各組大鼠肺組織病理改變:光鏡下模型組大鼠支氣管管腔明顯狹窄，部分管腔內(nèi)有粘液栓形成，管壁平滑肌增生，細(xì)支氣管纖毛粘連倒伏，部分上皮細(xì)胞變性壞死，杯狀細(xì)胞增多;肺組織內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤，以淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主，肺泡壁破壞，肺泡腔擴(kuò)大，部分破裂融合形成肺大泡，肺泡間隔明顯增厚，部分肺組織出現(xiàn)實(shí)變。5.肺泡平均內(nèi)襯間隔(MLI)和泡破壞指數(shù)(DI)測

8、定:模型組MLI（80.7±16.4），肺泡破壞指數(shù)DI（57.4±16.4）與對(duì)照組[（46.2±8.3）、(21.3±4.3)]相比，差異明顯(P＜0.05);經(jīng)ICS/LABA及川芎嗪干預(yù)后，C、D、E、F、G組MLI[(76.3±14.8)、(71.9±14.6)、(61.2±16.3)、（67.2±15.3）、（54.6±15.7)]和DI[(52.8±5.1)、（47.6±5.7）、(35.2±6.4)、（41.5±5.3）

9、、（29.4±4.8）]較模型組顯著降低(P＜0.05)，以G組明顯(P＜0.05)。6.各組氣道管壁和平滑肌厚度測定:模型組大鼠氣道管壁、平滑肌厚度[（36.3±5.8）、（23.7±3.7）]較對(duì)照組[（17.6±2.6）、(11.8±4.3)]明顯增厚（P＜0.05），經(jīng)ICS/LABA及川芎嗪干預(yù)后，C、D、E、F、G組氣道平滑肌及管壁較模型組顯著減輕(P＜0.05)，以G組明顯(P＜0.05)。7.血中CD4/CD8結(jié)果:模型

10、組CD4/CD8（1.442±0.16）較對(duì)照組(1.809±0.19)顯著降低（P＜0.05），經(jīng)ICS/LABA及川芎嗪干預(yù)后，C、D、E、F、G組CD4/CD8[(1.531±0.14)、(1.603±0.25)、(1.673±0.13)、(1.715±0.16)、(1.762±0.17)]較模型組顯著升高（P＜0.05），以G組明顯(P＜0.05)。8.MMP-9、SLPI免疫組化結(jié)果:(1)模型組大鼠MMP-9陽性系數(shù)（3.8

11、2±0.31）較對(duì)照組(1.80±0.19)明顯升高(P＜0.05)，經(jīng)ICS/LABA及川芎嗪干預(yù)后，C、D、E、F、G組MMP-9水平[（3.41±0.29）、(3.09±0.28)、(2.73±0.25)、(2.41±0.22)、（2.11±0.23）]較模型組顯著降低(P＜0.05)，以G組明顯(P＜0.05)。(2)模型組大鼠SLPI陽性系數(shù)（1.12±0.19）較對(duì)照組(3.91±0.32)明顯降低(P＜0.05)，經(jīng)ICS

12、/LABA及川芎嗪干預(yù)后，C、D、E、F、G組SLPI水平[（1.64±0.22）、(2.11±0.26)、(2.54±0.29)、(2.95±0.28)、(3.45±0.31)]較模型組顯著升高（P＜0.05），以G組明顯（P＜0.05）。9.MMP-9mRNA RT-PCR結(jié)果:模型組MMP-9mRNA相對(duì)含量（12.440±1.764）較對(duì)照組(1.498±0.378)明顯增多(P＜0.05)，經(jīng)ICS/LABA及川芎嗪干預(yù)后，C

13、、D、E、F、G組MMP-9mRNA水平[(10.785±1.392)、(9.616±1.187)、(6.671±1.026)、(6.156±1.151)、(2.440±0.693)]較模型組顯著降低(P＜0.05)，以G組明顯（P＜0.05）。相關(guān)分析表明，MMP-9與FEV0.3/FVC呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)(r=0.8613 P＜0.05); SLPI與FEV0.3/FVC呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)(r=0.8321 P＜0.05)。

14、　　結(jié)論: 1香煙煙熏加氣管內(nèi)滴入脂多糖可以成功復(fù)制大鼠慢性阻塞性肺疾病模型。2煙熏及氣道反復(fù)感染可促使肺組織中TGF-β1、MMP-9的表達(dá)升高和SLPI水平及CD4/CD8水平降低，引起COPD的發(fā)生發(fā)展。3 ICS/LABA及川芎嗪干預(yù)治療可減輕COPD氣道重塑及肺組織破壞，其機(jī)制可能與抑制肺組織中TGF-β1、MMP-9的表達(dá)，上調(diào)SLPI及CD4/CD8水平有關(guān)。4高劑量ICS/LABA抑制作用優(yōu)于低劑量，聯(lián)合用藥優(yōu)于單一用藥