雙色熒光示蹤膠質(zhì)瘤原位移植模型的建立及其惡變的腫瘤間質(zhì)細(xì)胞耐輻射特性的研究.pdf

1、第一部分雙色熒光示蹤膠質(zhì)瘤原位移植模型的建立及其特征分析
　　目的:建立紅、綠雙色熒光示蹤的膠質(zhì)瘤原位移植模型,并分析其實(shí)用價(jià)值。
　　方法:將發(fā)紅色熒光的C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞接種于綠色熒光裸小鼠腦內(nèi),動(dòng)態(tài)活體熒光成像。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),取全腦做連續(xù)冰凍切片,在普通光鏡、熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡下觀察移植瘤組織結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果:活體熒光顯像分析顯示,接種腫瘤細(xì)胞的相應(yīng)部位均可見到發(fā)紅色熒光的腫瘤團(tuán)塊影存在,并且其大小隨著腫瘤移

2、植時(shí)間的延長(zhǎng)而增大。在移植瘤組織冰凍切片中,可清晰顯示腫瘤組織中存在紅色、綠色和黃色等3種顏色的熒光細(xì)胞,并可在不同部位界定3種熒光細(xì)胞之間的位置關(guān)系;腫瘤細(xì)胞遷徙、定植及其與宿主細(xì)胞的融合等清晰可見;根據(jù)熒光顏色可以鑒別組成腫瘤血管的起源細(xì)胞是宿主細(xì)胞(綠色)、腫瘤細(xì)胞(紅色)或者是腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞融合(黃色)。此外,腫瘤周邊微環(huán)境中宿主固有的星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞被激活和去分化成Nestin陽性細(xì)胞。
　　結(jié)論:與傳統(tǒng)模

3、型比較,雙色熒光示蹤的膠質(zhì)瘤原位移植模型在腫瘤活體成像及研究腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移、腫瘤血管生成和腫瘤周邊微環(huán)境中宿主固有細(xì)胞被激活等方面,具有更高的實(shí)用價(jià)值。
　　第二部分膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤間質(zhì)宿主惡變細(xì)胞耐輻射特性的初步研究
　　目的:課題組前期研究顯示膠質(zhì)瘤腫瘤間質(zhì)中源于宿主的細(xì)胞可被膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞誘導(dǎo)惡變,但這些惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞對(duì)射線是否與膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞一樣高度抵抗尚不明確,本文旨在初步探索這些惡變細(xì)胞對(duì)射線的敏感性及

4、可能的分子機(jī)制。
　　方法:連續(xù)多次輻射誘導(dǎo),篩選并建立比膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞 SU3更加耐輻射的SU3-5R細(xì)胞;分別將SU3、SU3-5R及 SU3誘導(dǎo)惡變的宿主少突膠質(zhì)細(xì)胞 ihBTC2輻射,計(jì)算克隆形成率,繪制各細(xì)胞株放射劑量-存活曲線;熒光定量PCR檢測(cè)各細(xì)胞株輻射后Notch1 mRNA及Hes1 mRNA的表達(dá)水平;Western blot檢測(cè)ihBTC2細(xì)胞Notch信號(hào)通路下游輻射相關(guān)蛋白Bcl-2及pAkt表達(dá)水平。

5、
　　結(jié)果:膠質(zhì)瘤間質(zhì)宿主惡變細(xì)胞ihBTC2比耐輻射細(xì)胞SU3-5R更加輻射抵抗,表現(xiàn)為細(xì)胞增殖快,SF2值較高,輻射誘導(dǎo)性細(xì)胞凋亡壞死較低,輻射后Notch1、pAkt、Bcl-2表達(dá)水平顯著增高,而采用γ-分泌酶抑制劑(GSIs)阻斷Notch信號(hào)通路可提高其對(duì)射線的敏感性。
　　結(jié)論:在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中,腫瘤間質(zhì)惡變的宿主少突膠質(zhì)細(xì)胞ihBTC2對(duì)射線更加抵抗,可能與Notch信號(hào)通路激活密切相關(guān),這對(duì)進(jìn)一步研究腫瘤間