版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、惡性膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性腦腫瘤之一,目前的主要治療手段包括手術(shù)、放療以及化療,但即使這些治療方法聯(lián)合應(yīng)用,膠質(zhì)瘤病人的預(yù)后仍然較差。新興的治療方法包括免疫治療、小分子靶向藥物治療以及基因治療等,為膠質(zhì)瘤的治療提供了光明的前景。其中細胞免疫治療方法近年來不斷推陳出新,在各種生物治療中表現(xiàn)突出。1985年Rosenberg首次應(yīng)用自體淋巴因子激活的殺傷細胞(Lymphokine Activated Killer cells,LAK)治療黑
2、色素瘤,自此細胞免疫治療已逐步應(yīng)用于慢性白血病、腎癌以及乳腺癌等并取得一定療效。也有研究者嘗試應(yīng)用該方法治療腦膠質(zhì)瘤,但由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫的特殊性,病人的總體生存期未見明顯改善,并且腦水腫等副作用也限制了其發(fā)展。
近年來隨著免疫學(xué)技術(shù)的不斷進步及中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫概念的更新,腦膠質(zhì)瘤的細胞免疫治療迎來了新的機遇。其T淋巴細胞即胸腺依賴淋巴細胞,簡稱T細胞。來源于骨髓多能干細胞,是重要的免疫細胞。成熟的T細胞經(jīng)血流分布至外周免疫
3、器官的胸腺依賴區(qū)定居,并可經(jīng)淋巴管、外周血和組織液等進行再循環(huán),在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中,同樣發(fā)揮著重要的免疫作用。T細胞過繼免疫治療近年來不斷推陳出新。本研究探討了T細胞過繼免疫治療膠質(zhì)瘤的方法,即應(yīng)用GL261細胞混合抗原誘導(dǎo)樹突狀細胞(Dentric Cell,DC)成熟,成熟DC體外刺激并擴增外周T細胞,將這種T細胞回輸膠質(zhì)瘤荷瘤鼠模型來治療膠質(zhì)瘤,并用驗證其可行性和有效性,為今后細胞過繼免疫治療臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
目的
4、:探究GL261腦膠質(zhì)瘤細胞裂解物制備的抗原誘導(dǎo)的特異性T細胞對于小鼠腦膠質(zhì)瘤過繼免疫治療的可行性及有效性。
方法:培養(yǎng)GL261腦膠質(zhì)瘤細胞,用反復(fù)凍融法制備GL261細胞混合抗原。在無菌環(huán)境下提取健康C57BL/6小鼠骨髓單核細胞,用鼠源性粒-巨噬細胞集落刺激因子(mouse-derived Granulocyte-MacrophageColony-Stimulating Factor, mGM-CSF)、鼠源性白介素-4
5、(mouse-derived Interleukin-4,mIL-4)體外誘導(dǎo),進而獲取未成熟DC,將未成熟DC與抗原共孵育獲取成熟樹突狀細胞。在無菌條件下取出健康C57BL/6小鼠脾臟并剪碎,用胰酶消化成單細胞懸液并裂解紅細胞得到脾臟細胞懸液,用尼龍毛柱法分選脾臟細胞獲取T細胞。將成熟DC與T細胞共育獲取GL261膠質(zhì)瘤特異性T細胞。流式細胞儀檢測獲取的膠質(zhì)瘤特異性T細胞的增殖情況并觀察膠質(zhì)瘤特異性T細胞的亞群變化,MTT法檢測膠質(zhì)瘤
6、特異性T細胞對GL261膠質(zhì)瘤細胞的體外殺傷作用。
用ALC-H型小鼠腦立體定向儀固定小鼠頭顱,將GL261膠質(zhì)瘤單細胞懸液注入健康C57BL/6小鼠建立GL261-C57BL/6小鼠腦膠質(zhì)瘤模型,共注射16只小鼠,隨機分成治療組和對照組,每組8只。治療組用上述膠質(zhì)瘤特異性T細胞進行尾靜脈注射免疫治療,對照組尾靜脈注射PBS。治療結(jié)束后,用流式細胞儀檢測小鼠外周血中T細胞亞群變化情況,并觀察兩組的生存期。
結(jié)果:①C
7、57BL/6小鼠骨髓單核細胞經(jīng)細胞因子誘導(dǎo)6天后,CD11c+比例為(87±3.47)%,小鼠骨髓單核細胞可被成功誘導(dǎo)為未成熟DC。②未成熟DC與抗原共育18小時后,CD80、CD86表達增高(P<0.05),成功獲得了成熟DC。③用成熟DC刺激T細胞,72小時后T細胞分裂指數(shù)可達0.56±0.01,而用未成熟DC刺激T細胞72小時后T細胞分裂指數(shù)僅為0.28±0.02,表明成熟DC能顯著促進T細胞增殖(P<0.05)。④未成熟DC與T
8、細胞共育6天后,T細胞亞群發(fā)生變化:CD8a/CD4比值為0.63±0.06,而成熟DC組為2.03±0.06(P<0.05)。⑤分別按效靶比為20∶1、40∶1、60∶1的濃度梯度進行體外殺傷實驗,隨著效靶比升高,T細胞對GL261膠質(zhì)瘤細胞的殺傷率逐漸升高,當(dāng)效靶比分別為40∶1和60∶1時,成熟DC誘導(dǎo)的GL261膠質(zhì)瘤特異性T細胞殺傷率分別為(40.67±1.53)%和(62.67±2.52)%,未成熟DC組分別為(22±2.6
9、5)%和(26.33±2.08)%,成熟DC誘導(dǎo)的T細胞對膠質(zhì)瘤細胞的殺傷作用顯著高于未成熟DC誘導(dǎo)的T細胞(P<0.05)。⑧核磁共振能夠證實膠質(zhì)瘤原位模型接種成功。⑦T細胞治療后小鼠外周血CD8a/CD4比值可達1.02±0.28,而對照組僅為0.69±0.09(P<0.05)。⑧治療組小鼠生存期較對照組明顯延長(P<0.05)。
結(jié)論:GL261細胞混合抗原致敏的成熟DC能夠促進T細胞增殖并提高殺傷性T細胞的比例,膠質(zhì)瘤
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 人γδT細胞過繼免疫治療的臨床前研究.pdf
- 腦膠質(zhì)瘤免疫治療的實驗研究.pdf
- 胰腺癌γδT淋巴細胞過繼免疫治療的實驗研究.pdf
- 半相合腫瘤特異性淋巴細胞過繼免疫治療腫瘤的小鼠模型研究.pdf
- 過繼免疫細胞治療護理
- 剔除調(diào)節(jié)性T細胞增強RAK過繼免疫治療機制的研究.pdf
- 替莫唑胺化療聯(lián)合PD1抗體免疫治療小鼠原位膠質(zhì)瘤模型的實驗研究.pdf
- mIL-21瘤苗在腫瘤過繼免疫治療中作用的研究.pdf
- 樹突狀細胞介導(dǎo)的抗胃癌過繼免疫治療的臨床前研究.pdf
- DC-CIK細胞用于肺癌的過繼免疫治療——病例報告2例.pdf
- 臍血CIK細胞過繼免疫治療中晚期肺癌病人的臨床研究.pdf
- 腫瘤細胞CRT表達對荷瘤小鼠免疫環(huán)境的影響及其應(yīng)用于過繼免疫治療的實驗研究.pdf
- 特異性CTL對移植性小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤免疫治療的研究.pdf
- DC--CIK過繼免疫治療聯(lián)合化療對食管癌患者T細胞亞群的影響.pdf
- 膠質(zhì)瘤氬氦凍融產(chǎn)物負載樹突狀細胞介導(dǎo)大鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的免疫治療研究.pdf
- Dendritoma治療小鼠移植性腦膠質(zhì)瘤的實驗研究.pdf
- 惡性膠質(zhì)瘤及顱內(nèi)轉(zhuǎn)移瘤的基因與免疫治療.pdf
- 負載膠質(zhì)瘤干細胞抗原的樹突狀細胞對腦膠質(zhì)瘤治療作用的研究.pdf
- CD40信號聯(lián)合細胞因子體外制備過繼免疫治療細胞的實驗研究.pdf
- 胃癌不同分化層級細胞的分離鑒定及在過繼免疫治療中的應(yīng)用.pdf
評論
0/150
提交評論