下頜神經切斷術后VGluT1和CGRP在大鼠三叉神經復合體中表達的變化.pdf

1、周圍神經作為聯(lián)系中樞神經系統(tǒng)(centralnervoussystem，CNS)與外周感受器或者效應器之間的橋梁，在神經傳遞、神經營養(yǎng)等方面發(fā)揮著重要作用。由于其分布廣泛的特點，常因外傷、壓迫及缺血而損傷。以往的研究表明，周圍神經損傷能夠引起受損神經元(包括初級傳入神經元和運動神經元)的胞體或終末內某些神經活性物質及其受體的表達發(fā)生一系列變化，其中與神經生長和營養(yǎng)有關的物質常發(fā)生上調，而與神經傳遞有關的物質則發(fā)生下調；與此同時，受損神經

2、元的周圍常伴隨發(fā)生膠質反應及神經膠質增生等變化。所有這些變化被認為是神經元對其所受損傷的一種適應性反應。 谷氨酸(glutamate，Glu)是初級傳入纖維內重要的神經遞質，Glu在神經元內合成后必須被囊泡膜谷氨酸轉運體(vesicularglutamatetransporter，VGluT)轉運到突觸囊泡內，才能通過胞吐作用完成突觸傳遞。目前人們已經發(fā)現(xiàn)了三種VGluTs，即VGluT1、VGluT2和VGluT3，并認為它們

3、能夠作為Glu能神經纖維終末的特異性標記物。最近的研究顯示，傳遞觸壓覺和本體覺信息的初級傳入纖維主要表達VGluT1，而傳遞傷害性信息的初級傳入纖維主要表達VGluT2，但在初級傳入纖維中未見VGluT3的表達，提示VGluT1可能參與外周非傷害性信息的傳遞。目前，關于周圍神經損傷對VGluT1表達影響的研究多見于脊髓和延髓背角，有關其在三叉神經復合體內變化的研究至今尚未見報道。 降鈣素基因相關肽(calcitoningene-

4、relatedpeptide，CGRP)是由37個氨基酸組成的生物活性肽，廣泛分布于CNS和周圍神經系統(tǒng)，并伴隨周圍神經分布于部分肌肉、呼吸道、消化道、子宮、膀胱、腎上腺等器官。在CNS分布的CGRP參與機體多種調節(jié)機制，包括對運動、感覺、胚胎發(fā)育以及神經內分泌等的調節(jié)，特別是其在神經再生的調節(jié)中發(fā)揮著重要作用。已有研究表明，周圍神經損傷能夠引起脊髓前角和腦干運動神經元胞體內的CGRP發(fā)生特征性改變，從而提示CGRP有可能參與了對受損神

5、經元的修復過程。目前，有關周圍神經損傷對CGRP表達影響的研究多見于胸、腰段脊髓前角、面神經核、疑核及舌下神經核，而有關其在控制咀嚼肌運動的三叉神經運動核內變化的研究卻很少，已有的研究也僅限于mRNA水平。而且有趣的是，周圍神經損傷后，CGRP及其mRNA在上述不同部位的表達變化趨勢有著顯著差別，其具體機制尚有待于進一步研究。 基于以上問題，本研究運用形態(tài)學方法結合圖像分析技術觀察了下頜神經切斷術后不同存活時間內VGluT1和C

6、GRP在大鼠三叉神經復合體不同核團內表達水平的變化。本論文包括以下兩個方面的內容： 1.下頜神經切斷術后VGluT1在大鼠三叉神經復合體不同核團內表達水平的變化 應用免疫組織化學和圖像分析技術，在光學顯微鏡下觀察下頜神經切斷術后不同存活時間內VGluT1在大鼠三叉神經復合體不同核團內表達水平的變化。結果如下： (1)正常大鼠三叉神經復合體內可觀察到大量VGluT1免疫活性物質，且主要分布于終末內。 (2)

7、切斷一側下頜神經后，手術側與對照側相比，術后存活1周組的三叉神經感覺主核(principalsensorytrigeminalnucleus，Vp)背側部內VGluT1免疫活性物質的表達有所下降(P＜0.05)； (3)術后存活2周組的Vp背側部、三叉神經脊束核尾側亞核(caudalspinaltrigeminalnucleus，Vc)背側部、三叉神經脊束核極間亞核(interpolarspinaltrigeminalnucle

8、us，Vi)背側部，以及三叉上核(supratrigeminalnucleus，Vsup)和三叉神經運動核(trigeminalmotornucleus，Vmo)內VGluT1免疫活性物質的表達明顯下降(P＜0.01)，且與術后存活1周組手術側比較其下降有顯著差異(P＜0.05)； (4)術后存活3周組上述部位內VGluT1免疫活性物質表達的下降更加明顯(P＜0.01)，且與前兩組手術側相比均有顯著差異(P＜0.01或P＜0.0

9、5)；其中在Vmo內的表達幾乎完全消失。 以上結果提示：切斷初級傳入神經元的周圍突可以導致其中樞突終末內VGluT1的表達水平下降；三叉神經復合體內部分VGluT1陽性終末來源于外周。 2.下頜神經切斷術后CGRP在大鼠三叉神經運動核內表達水平的變化應用免疫組織化學、免疫熒光組織化學和圖像分析技術，分別在光學顯微鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察下頜神經切斷術后不同存活時間內CGRP在大鼠三叉神經運動核內表達水平的變化。結果

10、如下： (1)下頜神經切斷能夠引起手術側Vmo內CGRP陽性產物在胞體內的表達顯著上調，其中于術后3天和35天時先后達到高峰，呈“駝峰式”變化；對照側也有顯著變化，但沒有手術側變化明顯； (2)定量分析顯示下頜神經切斷后手術側Vmo內運動神經元的數(shù)量沒有明顯減少，且絕大部分用特異性神經元標記物神經元核蛋白(neuronalnuclearprotein，NeuN)標記的存活運動神經元均表達CGRP； (3)光密度分

11、析和細胞計數(shù)結果均顯示手術側運動神經元周圍膠質纖維酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)陽性產物的表達隨術后存活時間的延長而逐漸增加。 以上結果提示：下頜神經切斷后，Vmo內CGRP表達呈“駝峰式”變化，其中早期上調可能是受損運動神經元的急性應激反應，而其晚期上調則可能在受損運動神經元的神經再生及功能恢復過程中發(fā)揮重要的營養(yǎng)作用；此外，受損運動神經元周圍被激活的星形膠質細胞可能也參與了此過