塞來昔布聯(lián)合奧曲肽抑制人體胃癌生長和轉(zhuǎn)移的組織病理反應(yīng)及分子靶點(diǎn)研究.pdf

1、胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率在各種腫瘤中占第一位。目前手術(shù)仍然是胃癌的最主要治療手段，但由于大部分胃癌在確診時已處于中晚期，手術(shù)率僅約50％。為提高手術(shù)率及術(shù)后存活期，多年來各國學(xué)者對圍手術(shù)期的處理進(jìn)行了不懈的探索，但目前尚無一種療效好而副反應(yīng)小的理想治療方案。近年來非細(xì)胞毒性藥物的應(yīng)用日益受到重視，其中尤以環(huán)氧合酶抑制劑及生長抑素類似物為研究熱點(diǎn)，基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)二者能明顯抑制胃癌的生長及轉(zhuǎn)移。 本課題首次聯(lián)合環(huán)氧合酶

2、-2抑制劑塞來昔布和生長抑素類似物奧曲肽應(yīng)用于人體胃癌的術(shù)前治療，并探討該方案能否抑制人體胃癌的生長、轉(zhuǎn)移及其分子作用靶點(diǎn)。 方法：1.塞來昔布聯(lián)合奧曲肽抑制人胃癌生長的臨床隨機(jī)對照研究51例胃癌患者術(shù)前隨機(jī)分3組：對照組15例，術(shù)前不用藥物；塞來昔布組18例，術(shù)前口服塞來昔布，0.2g，qd，×7d；聯(lián)合組18例，術(shù)前口服塞來昔布0.2g，qd，+奧曲肽100μg，皮下注射，qd，×7d。術(shù)中切除標(biāo)本送組織學(xué)研究，分析胃癌組織

3、壞死、炎細(xì)胞浸潤及纖維組織增生情況；免疫組化檢測胃癌組織的微血管密度(MVD)及胃癌細(xì)胞COX-2的表達(dá)情況，DNA末端原位標(biāo)記染色法檢測胃癌細(xì)胞凋亡。實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測術(shù)前內(nèi)鏡活檢的胃癌組織生長抑素受體(SSTR)-1、2、3型的mRNA表達(dá)量。 2.塞來昔布聯(lián)合奧曲肽抑制人胃癌轉(zhuǎn)移的臨床隨機(jī)對照研究75例胃癌患者術(shù)前隨機(jī)分3組，每組25例，方案同前。用免疫組織化學(xué)方法檢測術(shù)中切除胃癌標(biāo)本中的上

4、皮性鈣粘附蛋白(E-Cadherin，E-Cad)及基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase，MMP)-2、MMP-9的表達(dá)情況，免疫蛋白印跡法(Westernblotting)定量分析胃癌組織MMP-2及MMP-9蛋白表達(dá)；每組隨機(jī)選10例患者的胃癌手術(shù)標(biāo)本，用免疫磁珠分選法分離胃癌細(xì)胞，并作穿膜侵襲實驗，比較三組胃癌細(xì)胞的遷移能力。術(shù)后1年隨訪三組患者的生存率。 3.探討塞來昔布及奧曲肽的抗腫瘤的分子作

5、用靶點(diǎn)胃癌患者術(shù)前隨機(jī)分為3組，每組15例，方案同前。所有術(shù)前非胃癌或胃癌組織均經(jīng)電子胃鏡活檢獲得，非胃癌組織在內(nèi)鏡和病理上為慢性淺表性胃竇炎。用RT-PCR方法檢測樣本非甾體類抗炎藥(NSAIDs)活化基因-1(NSAIDs-activatedgene，NAG-1)的mRNA表達(dá)，用生物分子相互作用系統(tǒng)技術(shù)檢測2型生長抑素受體(SSTR-2)表達(dá)。 結(jié)果：1.塞來昔布聯(lián)合奧曲肽抑制人胃癌生長的臨床隨機(jī)對照研究與對照組比較，聯(lián)合

6、組胃癌組織有顯著壞死(p＜0.05)，纖維組織增生明顯(p＜0.05)，其胃癌細(xì)胞凋亡率(7.06％)高于對照組(6.23％)，p＜0.05；塞來昔布聯(lián)合奧曲肽使腫瘤組織中的MVD(20.44)較對照組(24.87)明顯減少(p＜0.05)，而各組COX-2表達(dá)無明顯差異。所有胃癌組織均有SSTR-1，SSTR-2及SSTR-3的mRNA表達(dá)。 2.塞來昔布聯(lián)合奧曲肽抑制人胃癌轉(zhuǎn)移的臨床隨機(jī)對照研究聯(lián)合組胃癌組織E-Cad異常表

7、達(dá)率(28.0％vs56.0％)、MMP-2及MMP-9量(OD值分別為：99.4±19.8vs314.4±11.4；89.0±12.6vs241.3±12.3)，均較對照組明顯降低(p＜0.05)。聯(lián)合組胃癌細(xì)胞遷移能力比對照組降低了38％，p＜0.05。在隨訪1年的35例患者中，胃癌對照組及塞來昔布組的1年存活率均為80％(分別為12/15，8/10)，而聯(lián)合用藥組為100％(10/10)。 3.探討塞來昔布及奧曲肽的抗腫瘤

8、的分子作用靶點(diǎn)RT-PCR結(jié)果顯示，各組均有NAG-1mRNA表達(dá)，但應(yīng)用塞來昔布后(塞來昔布組及聯(lián)合組)后，能上調(diào)NAG-1的表達(dá)，與術(shù)前非胃癌及胃癌組織、術(shù)后胃癌對照組比較，p＜0.05。生物分子相互作用系統(tǒng)檢測顯示，僅8.0％術(shù)前非胃癌組織有SSTR-2表達(dá)，而胃癌組織中陽性率(36.0％)顯著提高(p＜0.01)。且術(shù)前非胃癌組織SSTR-2表達(dá)量低于胃癌組織。術(shù)后胃癌對照組SSTR-2陽性率(13.3％)顯著低于術(shù)前胃癌(p＜

9、0.05)；但陽性標(biāo)本中SSTR-2表達(dá)量高于術(shù)前胃癌(p＜0.05)。單用塞來昔布或聯(lián)合治療方案后，SSTR-2表達(dá)率較胃癌對照組上調(diào)(p＜0.05)，陽性標(biāo)本中SSTR-2表達(dá)量也高于僅接受胃癌手術(shù)的對照組(p＜0.05)。 結(jié)論：1.塞來昔布聯(lián)合奧曲肽能抑制人體胃癌的生長。 2.塞來昔布聯(lián)合奧曲肽可減少人體內(nèi)胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。 3.塞來昔布既通過COX-2途徑也通過非COX-2途徑(NAG-1途徑)來發(fā)揮抗胃