少弱畸精子綜合征治療前后精子染色質(zhì)流式細(xì)胞術(shù)分析.pdf

1、目的：觀察采用中西藥處方治療少弱畸精子綜合癥(oligo-asteno-teratozoospermia syndrome，OAT)患者前后的精子染色質(zhì)變化。對精子吖啶橙(acridine orange，AO)染色后，從激光共聚焦顯微鏡觀察(fluorescence microscope，F(xiàn)M)與流式細(xì)胞術(shù)分析(flow cytometry，F(xiàn)CM)兩種方法進行評價，與計算機輔助精子分析相結(jié)合，明確精子激光共聚焦顯微鏡觀察與流式細(xì)胞術(shù)分

2、析在男性生育力判斷與不育癥療效評價體系中的作用。 方法： 1.一般資料隨機選取2007年1月～2007年6月就診于河北工程大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院、邯鄲市婦幼醫(yī)院、河北峰峰集團公司邯鄲醫(yī)院的OAT患者42例。入選標(biāo)準(zhǔn)：參照WHO精液分析標(biāo)準(zhǔn)(1999年)與2004年EUA男性不育診療指南。排除標(biāo)準(zhǔn)：梗阻性無精子癥、克氏征、支持細(xì)胞綜合癥?；颊吣挲g22～35歲，平均32歲。給予中西藥處方治療。治療前后留取精液標(biāo)本，留取前禁欲3～5d

3、。手淫法取精，立即置37℃孵箱液化。 2儀器與試劑 儀器：流式細(xì)胞儀(美國BD公司，F(xiàn)ACSCalibur型)。激光共聚焦掃描顯微鏡(美國BIO-RAD公司，MRC-1024型)。精子分析儀(北京清華同方公司，彩色版5.0)。 試劑：吖啶橙(acridine orange，AO)：北京華美公司。10×TEN緩沖液。酸處理液。AO儲存液。染色緩沖液。AO染液。保存于棕色瓶中。 制備參考樣品。 3方法

4、 將精液分為三份同時送檢。計算機輔助精子分析。精子AO染色激光共聚焦顯微鏡觀察。精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)流式細(xì)胞術(shù)分析。 4統(tǒng)計學(xué)方法：實驗數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS11.5統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料的比較采用t檢驗。a=0.05為顯著性檢驗水準(zhǔn)。 結(jié)果： 1計算機輔助精子分析：少弱畸精子綜合征經(jīng)中西藥處方治療前后精子參數(shù)密度和畸形率等均有變化，治療后較治療前明顯改善，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；而(a+b)級

5、活動力和活動率、直線運動精子等變化不明顯，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 2精子AO染色激光共聚焦顯微鏡觀察：可見AO可與雙鏈DNA結(jié)合呈單體形式發(fā)出綠色熒光，與單鏈DNA結(jié)合呈聚合物形式發(fā)出紅或黃色熒光，可以初步判斷核染色質(zhì)狀態(tài)。綠色與紅色熒光差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。另外經(jīng)切換光源觀察到，部分正常形態(tài)的精子AO染色是黃色，說明精子正常形態(tài)和精子核成熟度無相關(guān)性。 3精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)流式細(xì)胞術(shù)分析：少弱畸精

6、子綜合征經(jīng)中西藥處方治療前后αt、SD αt和COMP αt發(fā)生變化，其中αt和COMP αt差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。主群精子指數(shù)(master-group sperm index，MGSI)也存在顯著變化，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。在正常狀態(tài)的精液中，該群體精子量直接反應(yīng)本次精液的可受精能力。在治療前后檢測主群精子指數(shù)(MGSI)的變化，可以客觀了解本次射出體外的精子核聚合程度。結(jié)論： 通過不同方式對少弱畸

7、精子綜合征經(jīng)中西藥處方治療前后精子的研究，得到： 1計算機輔助精子分析，可以了解本次射出體外精液的精子外部特征，能夠反映治療前后精液的改善狀況。 2精子AO染色激光共聚焦顯微鏡觀察，可以初步了解本次射出體外精液的精子核聚合程度，進一步揭示了治療前后精子的核成熟程度的變化。 3精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)流式細(xì)胞術(shù)分析，顯示了治療前后精子αt、SD αt和COMP αt參數(shù)變化，對于反映精子負(fù)面質(zhì)量較為肯定。本研究中，主群精子指