hAMSCs向肝樣細胞分化及聯(lián)合硫普羅寧移植治療小鼠急性肝損傷.pdf

1、第一部分共培養(yǎng)hAMSCs向肝樣細胞分化體系建立與基因表達譜分析
　　 目的：建立非接觸式共培養(yǎng)誘導人羊膜間充質干細胞(human amniotic mesenchymalstem cells，hAMSCs)分化為人肝樣細胞的培養(yǎng)體系，比較不同誘導體系與hAMSCs誘導前后基因及蛋白表達的差異。
　　 方法：采用機械分離和二酶消化法培養(yǎng)hAMSCs，流式細胞儀術和免疫細胞化學鑒定hAMSCs，非接觸式共培養(yǎng)和細胞因子誘導

2、hAMSCs向肝樣細胞分化，細胞形態(tài)學觀察，糖原、油紅染色及免疫細胞化學染色鑒定肝樣細胞，ELISA法檢測白蛋白含量，基因芯片檢測各組細胞基因表達水平異同。
　　 結果：第3、4代hAMSCs表達CD44、CD29、CD73、CD166和CD49d，高純度表達波形蛋白，基本不表達CD34和CD45。第4代hAMSCs與正常肝細胞系HL-7702非接觸式共培養(yǎng)，HGF和bFGF-2誘導培養(yǎng)hAMSCs，21d后，可見多角形細胞呈非

3、典型的巢狀排列，糖原染色陽性，油紅染色可見較多脂滴存在，與未誘導hAMSCs比較，所誘導肝樣細胞表達HNF-3β明顯增高，而CK-18改變不明顯，共培養(yǎng)誘導組肝樣細胞表達甲胎蛋白增加。hAMSCs和誘導的肝樣細胞，胞漿均表達白蛋白，但細胞培養(yǎng)液中未檢測到白蛋白。在10類88個基因的檢測中，發(fā)現(xiàn)共培養(yǎng)體系誘導的肝樣細胞與未誘導的hAMSCs之間存在13個基因的表達差異；共培養(yǎng)和細胞因子誘導的肝樣細胞之間也存在12個基因的表達差異；未誘導的