骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)急性肝損傷的治療作用與NF-κB和CUGBP1的表達(dá).pdf

1、目的：觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone morrow stem cells，BMSCs）移植對(duì)急性肝損傷小鼠的治療作用,研究通過靜脈移植的BMSCs在急性肝損傷小鼠肝組織內(nèi)的分布和遷移特點(diǎn)，并探討其促修復(fù)作用的轉(zhuǎn)錄激活和mRNA剪接機(jī)制。
　　方法：雌性昆明種小鼠42只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、損傷模型組和干細(xì)胞移植組。分離同種小鼠BMSCs，體外擴(kuò)增、BrdU標(biāo)記后經(jīng)尾靜脈注入以40％CCl4一次性灌胃制備的急性肝損傷小鼠體內(nèi)。于灌胃

2、后第5天、第10天、第15天分別取損傷模型組和干細(xì)胞移植組小鼠的肝臟，正常對(duì)照組不做處理，直接取肝臟，各組均制備石蠟切片和冷凍切片，并留取新鮮組織，蘇木精-伊紅（HE）染色觀察肝組織的結(jié)構(gòu)變化，免疫組織化學(xué)染色追蹤BrdU陽(yáng)性標(biāo)記干細(xì)胞在肝組織內(nèi)的遷移和分布情況，免疫組織化學(xué)染色及Western Blot技術(shù)檢測(cè)肝組織中轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、RNA結(jié)合蛋白CUGBP1的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：（1）HE染色結(jié)果顯示，干細(xì)胞移植組第5、

3、第10、第15天肝組織的修復(fù)狀態(tài)明顯好于損傷天數(shù)相同的損傷模型組小鼠；干細(xì)胞移植組第15天時(shí)肝組織已接近正常。（2）免疫組化結(jié)果可見干細(xì)胞移植組小鼠在CCl4灌胃后第5天時(shí)肝組織內(nèi)散在分布著大量的黃色或褐色的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞胞核。干細(xì)胞移植組第10天BrdU陽(yáng)性細(xì)胞核的數(shù)量較同組第5天時(shí)少。干細(xì)胞移植組第15天受體鼠肝組織內(nèi)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞胞核數(shù)明顯減少。（3）NF-κB和CUGBP1蛋白的檢測(cè)，免疫組化結(jié)果顯示：正常對(duì)照組小鼠NF-κ

4、B和CUGBP1在胞漿淺表達(dá)或不表達(dá)，損傷模型組和干細(xì)胞移植組NF-κB和CUGBP1蛋白的表達(dá)均較正常對(duì)照組增高；干細(xì)胞移植組小鼠NF-κB和CUGBP1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度均較同時(shí)間點(diǎn)的肝損傷模型組要弱，差異均有顯著性（P<0.05）。同時(shí)間點(diǎn)損傷模型組和干細(xì)胞移植組NF-κB蛋白的表達(dá)均較CUGBP1強(qiáng)。Western blot結(jié)果顯示：與正常對(duì)照組相比，損傷模型組和干細(xì)胞移植組小鼠肝組織中NF-κB、CUGBP1蛋白的表達(dá)水平均增高，

5、與同時(shí)間點(diǎn)的損傷模型組相比，干細(xì)胞移植組小鼠肝組織中NF-κB、CUGBP1蛋白的表達(dá)水平均降低，干細(xì)胞移植組與損傷模型組同時(shí)間點(diǎn)之間差異均具有顯著性（P<0.05）。
　　結(jié)論：經(jīng)靜脈移植的BMSCs可以遷移至急性肝損傷小鼠肝臟，并對(duì)損傷肝臟有修復(fù)作用，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)單位面積內(nèi)BMSCs的數(shù)量有減少。干細(xì)胞移植對(duì)急性肝損傷的治療作用可能與下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和RNA結(jié)合蛋白CUGBP1的表達(dá)有關(guān)，推測(cè)干細(xì)胞移植可能通過抑制NF