抗除草劑bar基因甜菜葉綠體遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、PPT(Phosphinothricin)是一種非選擇性的除草劑，作為谷氨酰胺合成酶(Glutaminesynthetase,GS)的一種不可逆抑制劑，PPT可引起多種代謝紊亂并導(dǎo)致植物死亡。bar基因編碼的膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶(phosphinthricinacetyltransferase,PAT)，可使PPT的自由氨基乙?；瘡亩鴮?duì)PPT解毒。甜菜是我國(guó)重要的糖料作物，但對(duì)包括PPT在內(nèi)的除草劑十分敏感。因此，本研究選用了具有多種優(yōu)點(diǎn)

2、的葉綠體轉(zhuǎn)化方式，通過(guò)構(gòu)建甜菜葉綠體轉(zhuǎn)化載體，優(yōu)化甜菜遺傳轉(zhuǎn)化條件，擬獲得轉(zhuǎn)bar基因甜菜再生植株。這項(xiàng)研究可為今后選育抗除草劑甜菜品種提供親本材料。
　　通過(guò)對(duì)甜菜外植體分化再生研究，建立并優(yōu)化了甜菜再生體系，獲得了大量無(wú)菌苗用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。通過(guò)對(duì)甜菜離體葉柄的抗生素敏感性研究，確定了卡那霉素和壯觀霉素的適宜篩選濃度，分別為50mg/L和40mg/L。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，壯觀霉素的抑制作用要強(qiáng)于卡那霉素，由于壯觀霉素是目前葉綠體轉(zhuǎn)化中

3、應(yīng)用的最廣泛的抗生素之一，因此，本研究采用壯觀霉素作為篩選用抗生素，以40mg/L作為篩選濃度。
　　成功地構(gòu)建了bar基因甜菜葉綠體表達(dá)載體pSARBar，其中含有bar基因表達(dá)盒、aadA篩選標(biāo)記基因表達(dá)盒及同源片段atpB/rbcL，經(jīng)酶切鑒定證明了其正確性。采用基因槍法將甜菜葉綠體表達(dá)載體pSARBar轉(zhuǎn)化甜菜，經(jīng)抗性篩選、誘導(dǎo)分化，獲得一批抗性芽，多次繼代后，最終獲得26株抗性植株。對(duì)其中部分抗性植株進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果