水稻抗除草劑基因CYP81A6轉(zhuǎn)化油菜的研究.pdf

1、油菜（Brassica napus）是我國(guó)主要的油料作物，是食用油、蛋白質(zhì)和工業(yè)原料的重要來(lái)源。雜草極大地影響了油菜的產(chǎn)量和品質(zhì)，因此，培育抗除草劑油菜品種對(duì)油菜的生產(chǎn)具有十分重要的意義。苯達(dá)松和磺酰脲是兩種不同的除草劑，在生產(chǎn)上被廣泛用于清除稻田的闊葉雜草。細(xì)胞色素P450基因CYP81A6編碼一種單加氧酶，能使水稻對(duì)苯達(dá)松和磺酰脲產(chǎn)生抗性。轉(zhuǎn)入了CYP81A6基因的擬南芥和煙草也能獲得對(duì)這兩種除草劑的抗性。本研究以甘藍(lán)型油菜品系甲5

2、72為受體，通過(guò)農(nóng)桿菌（Agrobacterium tumefaciens）介導(dǎo)轉(zhuǎn)化水稻CYP81A6基因，獲得了抗苯達(dá)松和苯磺隆的油菜株系，為油菜的轉(zhuǎn)基因育種提供了種質(zhì)資源。
　　 本研究主要內(nèi)容包括：⑴以油菜下胚軸為外植體的轉(zhuǎn)化獲得了135個(gè)bastar抗性植株，PCR檢測(cè)結(jié)果表明其中的37株為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為27.4％。⑵利用Southern雜交分析了陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株，結(jié)果顯示目的基因在油菜基因組中的拷貝數(shù)為1-4個(gè)，在6個(gè)植

3、株中是單拷貝插入的。⑶以β-actin為內(nèi)參的半定量RT-PCR結(jié)果表明CYP81A6基因在所有轉(zhuǎn)基因株系中均能表達(dá)，且不同株系之間的表達(dá)量有差異。其中CYP81A6-1的表達(dá)量最低，株系CYP81A6-2的表達(dá)量最高。⑷待油菜長(zhǎng)至4-5片真葉時(shí)，分別用不同濃度的苯達(dá)松和苯磺隆噴灑T1代植株，進(jìn)行抗藥性鑒定。結(jié)果顯示非轉(zhuǎn)基因植株用濃度0.24g/L苯達(dá)松或1.0μg/ml苯磺隆處理時(shí)全部死亡，而轉(zhuǎn)基因植株用1.6g/L苯達(dá)松或5.0μg