創(chuàng)傷后一氧化氮在椎間盤軟骨終板細(xì)胞中變化的基礎(chǔ)研究.pdf

1、研究設(shè)計： 收集49例臨床上確診為胸腰椎爆裂骨折患者的相關(guān)臨床資料，在術(shù)中收集損傷椎體上位及下位椎間盤軟骨終板，并收集正常椎間盤軟骨終板標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)組織學(xué)檢測。觀察比較軟骨終板重要炎癥介質(zhì)NO及其上游合成酶的變化規(guī)律。 研究目的： 了解外傷后胸腰椎爆裂骨折N0在椎間盤軟骨終板中的改變，認(rèn)識外傷后NO在椎間盤軟骨終板中的產(chǎn)生和作用機制，并進(jìn)一步解釋NO在外傷后參與加速椎間盤退變過程中的作用。 研究背景：

2、 NO是近10年來發(fā)現(xiàn)的一種新的細(xì)胞信使分子和效應(yīng)分子，其結(jié)構(gòu)簡單，易擴散，反應(yīng)性強，性質(zhì)活潑而不穩(wěn)定，生物半衰期很短(約2-3s)。廣泛存在于生物體內(nèi)各組織器官中，由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生并釋放，參與機體內(nèi)多種生理及病理過程。近年來，有研究認(rèn)為NO參與了椎間盤退變及其繼發(fā)病理改變。NO，TNF-α，IL-1 β等炎性細(xì)胞因子通過自分泌或旁分泌方式作用于椎間盤細(xì)胞，改變其生物學(xué)行為，產(chǎn)生病理效應(yīng)，從而參與椎間盤退變。退變的椎間盤細(xì)胞在生物

3、化學(xué)上發(fā)生改變，產(chǎn)生各種炎性細(xì)胞因子，最終可能引起椎間盤突出。但是骨折后由于終板軟骨的生理病理改變，以及損傷后炎癥因子的增加(如NO，IL一1，TNF等)引起軟骨終板的退變并加速其軟骨細(xì)胞的凋亡，其作用的程度，作用機制是否也如自然退變中所示?且其上下軟骨終板的損傷程度在分子水平上是否有差別?國內(nèi)外尚未見有這方面的報到。 材料與方法： 臨床上收集49例胸腰椎爆裂骨折患者的臨床資料，在前路手術(shù)中按損傷椎體的相應(yīng)上下位置關(guān)系收

4、集爆裂椎體上位及下位椎間盤的軟骨終板。18份正常軟骨終板組織標(biāo)本取自3具新鮮尸體。 (1)用南京聚力生物工程研究所提供的試劑盒，以硝酸還原酶法測定上清液NO。此方法利用硝酸還原酶特異性將NO<,3><'->還原為NO<,2><'->，通過顯色深淺測定其濃度的高低，測定標(biāo)本中的NO濃度。 (2)對軟骨終板進(jìn)行石蠟包埋組織切片后，進(jìn)行NF-KB，iNOS的免疫組化染色，觀察其在受損軟骨終板組織及正常軟骨終板組織內(nèi)的表達(dá)特點。

5、(包括表達(dá)部位，表達(dá)強度，范圍)。 根據(jù)以上實驗結(jié)果比較： (1)NO含量在損傷椎體上位椎間盤軟骨終板與正常椎間盤軟骨終板間的差異; (2)NO含量在損傷椎體下位椎間盤軟骨終板與正常椎間盤軟骨終板間的差異; (3)NO含量在損傷椎體上、下軟骨終板間的差異; (4)NF-KB，iNOS在損傷椎體上、下位椎間盤軟骨終板內(nèi)表達(dá)的陽性率的差異; (5)NF-KB，iNOS在損傷椎體下位椎間盤上、下

6、軟骨終板與正常椎間盤軟骨終板內(nèi)表達(dá)的陽性率的差異。 結(jié)論： (1)在胸腰椎爆裂骨折中， NO含量及其上游核轉(zhuǎn)錄因子B(NF-κB)，誘導(dǎo)性一氧化氮合成酶(iNOS)在上位椎間盤軟骨終板的表達(dá)率明顯高于下位椎間盤軟骨終板，高于正常椎間盤軟骨終板。提示上位終板在胸腰椎爆裂骨折中受到的損傷較重。 (2)下位椎間盤軟骨終板NO含量及其上游核轉(zhuǎn)錄因子B(NF-κB)，誘導(dǎo)性一氧化氮合成酶(iNOS)的陽性表達(dá)率與正常椎間盤