雙孔鉀通道TASK-1在急、慢性缺氧性人肺血管收縮反應(yīng)中的作用及可能機(jī)制探討.pdf

1、目的：研究雙孔鉀通道TASK-1在急、慢性缺氧時人肺動脈平滑肌細(xì)胞中的表達(dá)變化，及酪氨酸激酶c-Src抑制劑等藥物干預(yù)后產(chǎn)生的影響，探討雙孔鉀通道TASK-1在急、慢性缺氧性人肺血管收縮反應(yīng)中的作用，及酪氨酸激酶c-Src調(diào)節(jié)TASK-1介導(dǎo)缺氧性人肺血管收縮反應(yīng)的分子機(jī)制。
　　方法：原代培養(yǎng)人肺動脈平滑肌細(xì)胞（human pulmonary artery smooth muscle cells，hPASMCs），肺動脈來源于既

2、往無肺血管疾病或低氧血癥病史的肺腫瘤患者切除的肺，相差顯微鏡下鑒定平滑肌細(xì)胞形態(tài)特征，采用抗平滑肌細(xì)胞抗體α-SMA免疫組織化學(xué)染色法鑒定細(xì)胞純度（陽性率95％以上）。當(dāng)培養(yǎng)皿中細(xì)胞生長密度融合至70%-90%時予以傳代，第3至第6代用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。運(yùn)用經(jīng)典缺氧模型對hPASMCs進(jìn)行缺氧培養(yǎng)，分為正常組（Con）、缺氧30min組（Hypoxia30’）、缺氧6h組（Hypoxia6h）和缺氧48h組（Hypoxia48h），此外

3、，缺氧48h組予以酪氨酸激酶c-Src抑制劑PP2、PP2類似物PP3和酪氨酸磷酯酶抑制劑bpV孵育，記為缺氧48h+PP2組（Hypoxia48h+PP2）、缺氧48h+PP3組（Hypoxia48h+PP3）和缺氧48h+bpV組（Hypoxia48h+bpV），應(yīng)用流式細(xì)胞儀記錄不同組細(xì)胞的細(xì)胞周期， RT-PCR技術(shù)檢測不同組細(xì)胞TASK-1的基因表達(dá)，Western Blot方法測定不同組細(xì)胞TASK-1的蛋白表達(dá)。
　

4、　結(jié)果：⑴細(xì)胞增殖周期變化：與正常對照組比較，缺氧30min組、缺氧6h組和缺氧48h組，隨缺氧時間延長，hPASMCs的S期百分率增加（P<0.001）；而與缺氧48h組比較，缺氧48h+PP2組hPASMCs的S期百分率下降（P<0.001）。⑵急、慢性缺氧時人肺動脈平滑肌細(xì)胞TASK-1的mRNA及蛋白表達(dá)變化：mRNA水平，與正常對照組比較，缺氧30min組TASK-1mRNA表達(dá)無顯著性差異（P>0.05），缺氧6h組TASK

5、-1mRNA表達(dá)增加(P<0.05)，缺氧48h組TASK-1mRNA表達(dá)顯著減少(P<0.001)；蛋白水平，與正常對照組比較，缺氧30min組、缺氧6h組和缺氧48h組，隨著缺氧時間延長，TASK-1蛋白表達(dá)降低(P<0.001)。⑶慢性缺氧時藥物干預(yù)后人肺動脈平滑肌細(xì)胞TASK-1 mRNA及蛋白表達(dá)變化：與缺氧48h組比較，缺氧48h+PP2組TASK-1mRNA及蛋白表達(dá)增加(P<0.01)，缺氧48h+bpV組TASK-1蛋

6、白表達(dá)下降（P<0.01），而缺氧48h+PP3組TASK-1蛋白表達(dá)無顯著性差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：①缺氧促進(jìn)人肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖，酪氨酸激酶c-Src調(diào)節(jié)缺氧后人肺動脈平滑肌細(xì)胞的增殖力變化。②在人肺血管平滑肌細(xì)胞膜上表達(dá)的雙孔鉀通道TASK-1，參與急、慢性缺氧性人肺血管收縮反應(yīng)，慢性缺氧抑制雙孔鉀通道TASK-1的表達(dá)。③酪氨酸激酶c-Src調(diào)節(jié)雙孔鉀通道TASK-1的表達(dá)介導(dǎo)缺氧性人肺血管收縮反應(yīng)。④雙孔鉀通