血管生成素在結(jié)直腸腫瘤中的表達(dá)以及缺氧對其調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文血管生成素在結(jié)直腸腫瘤中的表達(dá)以及缺氧對其調(diào)節(jié)作用的研究姓名：沈培強(qiáng)申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：陳增良20050501激江大學(xué)磺±學(xué)僚論文同時鼉?nèi)醢攵縍 T - P C R 檢測常氧釉缺氧狀念( 體織百分?jǐn)?shù)9 5 ％N 2 ，5 ％C 0 2 ；2 小時，4 小時，8 小時) F 體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌細(xì)胞S W 4 8 0 血管生成素A u g 一2 豹m R N A 表達(dá)，搽討袋襞踺

2、A a g 一2 m R N A 表達(dá)豹調(diào)節(jié)穆掰及其調(diào)節(jié)輟制。實驗方法1 、臨床資料及免疫組化浚繁瀵江大學(xué)斑震繁一醫(yī)院病理科2 0 0 0 年，2 0 0 4 年闖豹縫童腸艨熄手術(shù)標(biāo)本9 l 例，所有患者術(shù)前均未化療或放療。按全國大腸癌病理研究統(tǒng)一規(guī)范( 2 0 0 2 年) 褥繚照腸腺瘸分為3 縫：毫分佬豫瘸2 l 鍘、中分訖稼癌2 6 翻、羝分化腺癌4 4 例：D u k e s 分期：A 期3 例，B 期2 7 期，c 期5 4

3、例，D 期7 例。其中脈管侵犯1 8 側(cè)，淋巴繚轉(zhuǎn)移5 9 鍘。葡時選擇正常結(jié)壹麟組織石蟮標(biāo)本2 4 秘，選擇2 0 例結(jié)腸鏡摘除的縫直腸腺瘤作為對照。F ．Ⅷ單克隆抗體標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，采用E n v i s i o n 二步法。以抗A u g ．1 、A n g 一2 抗體檢測A n g 一1 、A n g 一2 贊白的襲達(dá)，采羯S A B C 法。爨性鯪暴判定：@ M V D 劌定：按照W e i d n e r 等的劌定標(biāo)準(zhǔn)。計

4、算著色的毛細(xì)血管和微小皿管。計數(shù)方法：每張染色切片在1 0 0 倍視野+ F 挑選矗管分毒漾高區(qū)域，然螽在2 0 0 繕睪雯努下詩鼗，茭詩5 令毒璺舅，毅其平均值。②A n g ．1 和A n g ，2 的判定：按照T o r i m u r a 等的判定標(biāo)準(zhǔn)，選擇染色均勻的結(jié)直腦上皮區(qū)域，在4 0 0 倍褫努下計數(shù)著色綏施占視瓣紹藤惑鼗懿孬分?jǐn)?shù)，共計數(shù)5 個視野，取平均值。饕色細(xì)胞數(shù) 7 5 ％為強(qiáng)陽性( + + ) 。2 、纓魏分組

5、秘缺氧姓蠼將在培養(yǎng)瓶內(nèi)生長怠好的S W 4 8 0 細(xì)胞分成缺氧2 小時、4 小時、8 小時和棠葷￡怨溪整，每矗蘸為?篷。禱生長至對數(shù)生長麓薅，麓入t O ％F B S 熬D M E M培養(yǎng)基，置于3 7 ℃、5 ％C 0 2 培漭箱預(yù)培養(yǎng)1 2 小時。然后置細(xì)胞于3 7 ℃、體積分?jǐn)?shù)9 5 ％N ：，5 ％C 0 2 黲獲氧墻薄簇，分搿接攮定薅闋避符孵蠢。3 、提取總R N A 和R T - P C R 反成按Y r i z l o