獨活揮發(fā)油對N-脂肪酰基乙醇胺水解酶的抑制作用以及抗炎作用的研究.pdf

1、目的：研究獨活（Radix Angelicae Pubescentis，RAP）揮發(fā)油對內(nèi)源性大麻素水解酶N-脂肪?；掖及匪饷?N-Acylethanolamine-hydrolyzing AcidAmidase，NAAA)、脂肪酰胺水解酶（Fatty Acid Amide Hydrolase，F(xiàn)AAH）、單?；视王ッ?Monoacylglycerol Lipase，MGL)水解活性的影響以及對脂多糖(LPS)誘導的小鼠巨噬細胞R

2、AW264.7炎癥反應模型的抗炎作用以及可能機制的探討。
　　 方法：采用水蒸氣蒸餾法提取獨活揮發(fā)油，GC/MS檢測化學成分；采用NAAA、FAAH、MGL過表達細胞蛋白和LC/MS檢測內(nèi)源性大麻素水解酶NAAA、FAAH、MGL的水解活性；采用LPS誘導小鼠巨噬細胞RAW264.7建立細胞炎癥反應模型；采用LC/MS檢測細胞內(nèi)N-棕櫚酸乙醇胺(N-Palmitoylethanolamine，PEA)水平；采用實時定量PCR(R

3、ealTime-PCR)檢測腫瘤壞子因子-α(TNF-α)、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)、白細胞介素-6(IL-6)mRNA表達：采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測TNF-α含量；采用Griess法檢測一氧化氮(NO)含量。
　　 結(jié)果：獨活揮發(fā)油可有效抑制NAAA水解活性，對FAAH只有在高劑量下有一定的抑制作用，對MGL沒有抑制作用；GC/MS鑒定出獨活揮發(fā)油的主要化學成分，包括蛇床子素(Osthole)、1，2-二氮-

4、1-雜萘硫醇(1，2-Dihydro-1-thioxophthalazine)、α-紅沒藥醇(α-Bisabolol)、4-羥基-2-甲基苯乙酮(4-Hydroxy-2-methylacetophenone)等20個化合物；在LPS誘導的RAW264.7細胞炎癥反應模型中，獨活揮發(fā)油能夠逆轉(zhuǎn)炎癥反應的發(fā)生，呈現(xiàn)出PEA升高和炎癥因子表達降低：細胞內(nèi)PEA水平上升，炎癥因子TNF-α、IL-6以及iNOSmRNA表達、TNF-α和NO釋放