甘草細(xì)胞放大培養(yǎng)調(diào)控研究.pdf

1、甘草被稱(chēng)為“國(guó)老”，在中醫(yī)中常有“十方九草”之說(shuō)，具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、止咳化痰、緩急止痛、調(diào)和諸藥之功效。解決甘草資源短缺的最有效方法之一是通過(guò)細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方式來(lái)生產(chǎn)有價(jià)值的活性物質(zhì)。本文主要圍繞提高甘草黃酮產(chǎn)量和細(xì)胞放大培養(yǎng)過(guò)程展開(kāi)了初步的研究，取得了以下成果： （1）研究了培養(yǎng)條件對(duì)甘草細(xì)胞生長(zhǎng)和黃酮合成的影響。確定了搖瓶轉(zhuǎn)速為120 rpm，通過(guò)向培養(yǎng)基中添加一定濃度的二甲基亞砜、甘露醇、Tween-20和條件培養(yǎng)

2、基，可以提高甘草黃酮的產(chǎn)量。并研究在培養(yǎng)過(guò)程中保持pH為5.1左右，可以有效提高甘草黃酮產(chǎn)量。 （2）研究了在甘草培養(yǎng)基中加入茉莉酸甲酯和二氫茉莉酮酸甲酯對(duì)甘草細(xì)胞生長(zhǎng)和黃酮合成的影響。結(jié)果表明，分別在第5天和第10天加入100 μmol/L二氫茉莉酮酸甲酯和茉莉酸甲酯能夠使甘草黃酮的產(chǎn)量達(dá)到最大，為108.5 mg/L和109.2 mg/L，分別為對(duì)照組的1.43和1.45倍。并研究了復(fù)合誘導(dǎo)子和前體對(duì)甘草細(xì)胞生長(zhǎng)和黃酮合成的

3、影響，發(fā)現(xiàn)均能提高甘草黃酮的產(chǎn)量，其中以苯丙氨酸+茉莉酸甲酯組合刺激最為有效，達(dá)到125 mg/L。 （3）研究了甘草細(xì)胞在250 ml搖瓶，2L搖瓶和10L發(fā)酵罐中的生長(zhǎng)和黃酮合成情況，并對(duì)甘草細(xì)胞在10L發(fā)酵罐中的代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行初步研究。隨著培養(yǎng)體積的擴(kuò)大，細(xì)胞的最大生物量、黃酮產(chǎn)量以及最大比生長(zhǎng)速率都在不同程度的下降。 （4）研究了2,4-D對(duì)甘草細(xì)胞生長(zhǎng)和黃酮合成的影響影響，并用IBA作為替代物，得到了很好的結(jié)果