一個極早型Alzheimer病家系的遺傳分析與病理學研究.pdf

1、2 Q ! Q 顯塑! 趔盈生堂絲途豎 二：仝拯呈型壘! ；b ￡i 堡￡! 叢塞丕煎塑籃公塹! i 叢型堂叢窒一個極早型A I z h e i m e r 病家系的遺傳分析與病理學研究專業(yè)名稱： 人體解剖與組織胚胎學研究生： 李強明導(dǎo)師： 臧貴勇副教授 楊明教授摘要摘要：本研究旨在確診該家系所患疾病是否為家族性神經(jīng)系統(tǒng)遺傳病、是否為阿爾茨海默病及在確診該疾病后嘗試檢N 3 個風險基因是否為該家系的致病基因。方法：詳細調(diào)查該家系成員臨床

2、資料，制作家系圖后結(jié)合該家系成員臨床資料診斷該疾病。對該家系先證者腦組織進行H E 染色、g o d i a n 銀染色、免疫組化檢測及運用聚合酶鏈式反應(yīng)( P o l y m e r a s eC h a i nR e a c t i o n ，P C R ) 擴增、D N A 直接測序?qū)Π柎暮Ｄ★L險基因：B 一淀粉樣蛋白前體( B —A m y l o i d p r o c u r s o rp r o t e i r l ，

3、A P P ) 基因第1 6 、1 7 # b 顯子及早老素1 ( P r e s e n i l i n s ，P S E N l ) 基因第5外顯子三個高風險位點進行檢測。結(jié)果：該家系所患疾病具有常染色體顯性遺傳特點。在先證者腦組織的額、顳、頂、枕、海馬發(fā)現(xiàn)大量典型老年斑( S e n i l ep l a q u e s ，S P ) 和神經(jīng)原纖維纏結(jié)( N e u r o f i b r i l l a r yt a n g l

4、 e s ，N F T ) 。同時在大腦皮質(zhì)層中發(fā)現(xiàn)路易小體。P S E N l 基因外顯子5 第9 0 個存在堿基置換( T —C ) ，導(dǎo)致異亮氨酸變?yōu)樘K氨酸( I l e l 4 3 T h r ) 。結(jié)論：1 ．該家系為具有常染色體顯性遺傳特點的遺傳病家系。2 ．該家系是一個具有典型病理特征的阿爾茨海默病家系。3 ．該家系中的A D 患者存在P S E N l 第5 號外顯子的突變( I l e l 4 3 T h r ) ，此

5、突變點可能與該家系發(fā)病有關(guān)。L 關(guān)鐮運A 碉爾茨海默病 老年斑神經(jīng)元纖維纏結(jié)路易小體2 Q ! Q 屈堡．! ：! 匠紅垡堂焦途塞 二仝拯望型皇! ! b ! i 堡! ! 叢窒丕笪塑佳坌塹塵叢型堂型墮l病是否為家族性阿爾茨海默病，我們收集了該家系發(fā)病成員的臨床資料進行分析以及所有能夠聯(lián)系的成員資料，制作了家系圖譜，進行遺傳特點分析。并對先證者的尸體進行尸檢，腦組織神經(jīng)病理學檢測。并探索性檢測了阿爾茨海默病的風險基因的3 個位點。一、材

6、料和方法1 ．實驗試劑及配制1 ．1 ．1 ．1 蛋白銀溶液配制：1 ％蛋白銀溶液l O O m l 內(nèi)加人1 0 ％乙酸水溶液0 ．7 充分攪拌過濾后再加入0 ．5 ％氫氧化鈉水溶液0 ．3 3m l 。調(diào)整證p H 值在6 左右。1 。1 ．1 ．2 還原液配制：l ％對苯二酚水溶液l O O m l 內(nèi)加入無水硫酸鈉4g 攪拌后一次性使用。1 ．1 ．1 ．3 0 ．5 ％氯化金水溶液。1 ．1 。1 ．4 2 ％草酸水溶液一次性

7、使用。1 。1 ．1 ．5 淀粉樣蛋白卜4 2 ( R a b b i t A n t i 一] 3 A m y l o i d1 - 4 2 ) 北京博奧森1 ．i ．1 ．6 泛素( R a b b i tA n t i ．U b i q u i t i n ) 北京博奧森1 ．1 ．1 ．7 磷酸化T a u 蛋白( R a b b i tA n t i ．P —T a up r o t e i n ) 北京博奧森1 ．1 ．1

8、．8 淀粉樣蛋白一N 端( A m y l o i d A 4 ( N 一1 8 ) ) S a n t a 公司1 ．1 ．1 ．9 淀粉樣蛋白卜4 0 ( 1 3 - A m y l o i d ( 2 0 ．1 ) ) S a n t a 公司! ．1 ．2 ．1 Q 一核突觸蛋白( 旺一S y n u c l e i n ) S a n t a 公司1 ．1 ．2 ．2 兔血清封閉液( 北京博奧森)1 ．1 。2 ．3 H i

9、s t o s t a i n t m - P l u s K i t s ( 美國Z Y M E D 公司)1 ．1 ．2 ．4 『F 常血清封閉液1 ．1 ．2 ．5 生物素化二抗( 山羊抗兔I g O )1 ．1 ．2 ．6 S A B C ( 鏈酶親和素一生物素一過氧化物酶復(fù)合物)1 ．1 ．2 ．7 D A B 顯色試劑盒( 北京博奧森公司)1 ．1 ．2 ．8 T a q D N A 聚合酶，天根生物工程有限公司，北京1 ．