選擇性TNFR1拮抗肽Hydrostatin-SN10治療炎癥性腸病的初步藥效學研究.pdf

1、炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）是一種累及回腸、直腸和結(jié)腸的特發(fā)性炎癥性腸道疾病，臨床表現(xiàn)為反復腹痛、腹瀉、腹部包塊、黏液血便、腸梗阻、腸穿孔、體重減輕等，此外患者還表現(xiàn)出各種不同程度的全身癥狀。IBD過去多見于西方發(fā)達國家，近幾年來包括中國在內(nèi)的亞洲地區(qū)的發(fā)病率呈直線上升趨勢，嚴重影響了患者的生活質(zhì)量，關(guān)于IBD治療的研究已成為消化系統(tǒng)疾病領(lǐng)域的研究熱點之一。然而到目前為止，臨床上尚未出現(xiàn)能夠

2、有效治療IBD的藥物。
　　本課題組前期獲得了一條抗炎活性肽Hydrostatin-SN10（10AA），該活性肽只與TNFR1結(jié)合，不與TNNF-α和TNFR2結(jié)合，具有專一選擇性?；诖搜芯炕A(chǔ)，本課題通過將mPEG2000的羧基與Hydrostatin-SN10肽鏈N-端天冬氨酸的游離氨基共價連接實現(xiàn)選擇性修飾，得到PEG-SN10。本研究采用葡聚糖硫酸鈉（dextran sulphate sodium salt，DSS，2

3、6~50KDa）和噁唑酮（oxazolone，OXZ）誘導的小鼠急性結(jié)腸炎模型，探討了候選藥物選擇性 TNFR1拮抗肽Hydrostatin-SN10治療炎癥性腸病的初步藥效學研究。
　　本文研究發(fā)現(xiàn)，在DSS誘導的小鼠急性結(jié)腸炎模型中，模型對照組小鼠體重明顯減輕，毛色暗淡，精神萎靡，肉眼可見血便，腹瀉嚴重，與空白對照組小鼠疾病活動指數(shù)（disease activity index，DAI）評分相比，模型組小鼠DAI評分明顯升高；

4、體重明顯減輕；頸椎脫臼法處死全部小鼠并將其解剖，取出完整結(jié)腸，觀察并測量發(fā)現(xiàn)：模型組小鼠結(jié)腸長度明顯縮短（P<0.001）；脾臟指數(shù)增加（P<0.001）；小鼠血清中促炎因子（TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ）含量顯著升高，抑炎因子（IL-10）含量顯著降低（P<0.01）；通過收集小鼠結(jié)腸組織勻漿液，測得小鼠結(jié)腸組織中髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性顯著升高（P<0.001）；提取小鼠結(jié)腸組織RN

5、A，TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γmRNA相對表達量明顯升高，IL-10 mRNA相對表達量明顯降低（P<0.05）。小鼠腹腔注射Hydrostatin-SN10和PEG-SN10后，上述病癥均得到顯著緩解。與DSS模型組小鼠相比，Hydrostatin-SN10和PEG-SN10治療組小鼠體重下降減緩，腹瀉次數(shù)減少，結(jié)腸長度縮短趨勢得到有效控制（P<0.001），脾臟指數(shù)、MPO活性均下降（p<0.001），說明Hydr

6、ostatin-SN10和PEG-SN10可以明顯改善DSS誘導的小鼠急性結(jié)腸炎癥狀。
　　在OXZ誘導的小鼠急性結(jié)腸炎模型中，Hydrostatin-SN10及PEG-SN10治療組的小鼠各項疾病癥狀均明顯好于模型組，比如小鼠體重變化情況、結(jié)腸炎相關(guān)疾病活動指數(shù)等，Hydrostatin-SN10和PEG-SN10給藥組小鼠的體重下降趨勢明顯得到抑制，DAI指數(shù)也低于模型組小鼠，治療效果與兩種陽性對照藥SASP和IFX等同，且陰

7、性對照組（隨機肽組和PEG組）并無疾病緩解癥狀；同樣， Hydrostatin-SN10及PEG-SN10治療組小鼠的結(jié)腸長度縮短、脾腫脹情況也有明顯的緩解現(xiàn)象（P<0.001）；MPO活性測定結(jié)果表明，Hydrostatin-SN10及PEG-SN10能顯著減少小鼠結(jié)腸病變組織的中性粒細胞數(shù)量（P<0.001）；蘇木精-伊紅（hematoxylin eosin，HE）染色結(jié)果表明，Hydrostatin-SN10及PEG-SN10能顯

8、著改善結(jié)腸的炎癥程度和病變范圍；實時熒光定量PCR（qRT-PCR）結(jié)果證實Hydrostatin-SN10及PEG-SN10對小鼠結(jié)腸組織中相關(guān)促炎因子（TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ）的表達具有抑制效果，而對結(jié)腸組織中相關(guān)抑炎因子（IL-10）的表達具有促進作用（P<0.05），因此Hydrostatin-SN10及PEG-SN10對于OXZ誘導的小鼠急性結(jié)腸炎也具有明顯的治療作用。
　　初步藥代動力學研究表明：

9、單劑量腹腔注射給藥1mg/kg Hydrostatin-SN10、5mg/kg PEG-SN10后測得的6只成年、健康SD大鼠體內(nèi)Hydrostatin-SN10的藥物濃度-時間曲線變化規(guī)律并不嚴格符合典型的房室模型，以非房室模型（統(tǒng)計矩）法計算的藥代動力學參數(shù)反映SD大鼠體內(nèi)藥代動力學的消除過程基本呈線性動力學特征。單劑量腹腔注射給藥1mg/kg Hydrostatin-SN10、5mg/kg PEG-SN10后測得的6只成年、健康S

10、D大鼠體內(nèi)Hydrostatin-SN10所對應(yīng)的藥代動力學藥時曲線下面積（AUC0-t）與給藥劑量基本呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r2=0.9936和r2=0.9921。Hydrostatin-SN10及PEG-SN10在SD大鼠體內(nèi)均具有較好的藥代動力學性質(zhì)， SD大鼠腹腔注射給藥1mg/kg Hydrostatin-SN10和5mg/kg PEG-SN10后，注射給藥的藥峰濃度Cmax分別為86.92±4.584μg/L和33.071

11、±1.697μg/L，達峰時間Tmax分別為0.833h和0.833h，末端消除半衰期t1/2分別為2.18±0.654h和3.789±1.368h，注射暴露量AUC(0-t)分別為74.043±17.065ug/L*h和32.087±6.317ug/L*h。
　　本課題完成了 TNFR1專一選擇性拮抗肽 Hydrostatin-SN10以及基于mPEG2000修飾的PEG-SN10治療IBD的初步藥效學研究和初步藥代動力學研究，