青蒿琥酯對MDS來源的髓樣抑制細(xì)胞增殖和凋亡的體外研究.pdf

1、目的：骨髓增生異常綜合征（Myelodysplastic syndrome，MDS）是起源于造血干細(xì)胞的克隆性疾病，以一系或多系外周血細(xì)胞減少、骨髓無效和/或病態(tài)造血，并易向急性白血?。ˋcute leucemia，AL）轉(zhuǎn)化為特點。MDS的骨髓微環(huán)境是MDS形成和發(fā)展的關(guān)鍵機制，腫瘤細(xì)胞通過利用和改變微環(huán)境來逃避免疫殺傷而優(yōu)勢于正常細(xì)胞生長。髓樣抑制細(xì)胞（Myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）是

2、一群具有相似生物學(xué)功能的異質(zhì)性細(xì)胞，包括骨髓祖細(xì)胞、未成熟髓系細(xì)胞(Immature myeloid cells， IMCs）、未成熟的巨噬細(xì)胞和未成熟的樹突狀細(xì)胞。MDSCs可通過調(diào)節(jié)固有免疫及適應(yīng)性免疫應(yīng)答促進(jìn)腫瘤發(fā)生免疫逃逸，如抑制CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞（Natural kill cells，NK）等的活化及免疫應(yīng)答。腫瘤微環(huán)境和MDSCs誘導(dǎo)的免疫耐受相互作用來促進(jìn)MDS的發(fā)展。因MDS多見于老年人，所以不

3、能承受強烈化療及行異基因造血干細(xì)胞移植（Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，Allo-HSCT），尤其對于高危的MDS患者，極易向白血病轉(zhuǎn)化，故預(yù)后極差。對于不適用行Allo-HSCT的患者，仍以藥物治療為主。MDS的藥物治療包括去甲基化藥物、組蛋白去乙?；敢种苿㈣F螯合劑及抗血管增殖藥物等。盡管這些藥物已經(jīng)應(yīng)用于臨床治療MDS，但這些藥物都沒有獲得持久療效。為中高?；?/p>

4、者尋找低毒、有效、經(jīng)濟(jì)的藥物治療是十分需要解決的臨床問題。青蒿琥酯(Artesunate，ART）是一種從中藥青蒿中提取出來的青蒿素的半合成衍生物，是治療惡性瘧疾最有效的低毒的藥物之一，研究發(fā)現(xiàn)其除具有抗瘧作用外,在體外研究中還發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤作用，ART可誘導(dǎo)MDS細(xì)胞系SKM-1細(xì)胞凋亡，并且ART與傳統(tǒng)化療藥物的殺傷機制不同，可能與其他MDS治療藥物存在協(xié)同作用。并且ART在治療腫瘤方面具有顯著的優(yōu)勢，如價格低廉，高效低毒、腫瘤靶

5、向性等。本實驗通過研究MDS患者外周血MDSCs、CD34+細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)目以及與MDS疾病惡性程度之間的關(guān)系。通過體外細(xì)胞培養(yǎng)實驗，檢測ART對MDS來源的MDSCs、NK細(xì)胞、CD34+細(xì)胞的各細(xì)胞群的變化，對進(jìn)一步研究MDS的發(fā)病機制，ART抗MDS機制有十分重要的臨床意義，對尋找新的藥物治療MDS具有重要意義。
　　方法：選擇2016年4月至2016年12月于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液內(nèi)科初治的MDS患者20例以及健康體檢

6、者10例為實驗對象。同時將MDS患者行IPSS評分對疾病惡性程度進(jìn)行分層分析。取實驗對象外周血各2ml,采用流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測其外周血中MDSCs（CD33+CD11b+CD14-HLA-DR-）、NK細(xì)胞（CD3-CD56+）和CD34+細(xì)胞比例。抽取3例MDS患者外周血各20ml，提取外周血單個核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs），并接種于96

7、孔板，用不同濃度的ART（終濃度分別為1、2.5、5、10umol/L）,處理相應(yīng)各孔48小時，用FCM檢測MDSCs、NK細(xì)胞、CD34+各群細(xì)胞的增殖和凋亡變化。
　　結(jié)果：
　　1.健康者外周血MDSCs比例（0.65％±0.28%）明顯低于MDS患者（2.39%±0.74%）（P<0.05），健康者外周血MDSCs比例（0.65%±0.28%）低于低危及中危-ⅠMDS患者（1.46%±0.17%）（P<0.05）；低

8、危及中危-ⅠMDS患者外周血MDSCs比例（1.46%±0.17%）低于中危-Ⅱ及高危MDS患者（2.69%±0.56%）（P<0.05）。
　　2.健康者外周血NK細(xì)胞占淋巴細(xì)胞百分比（12.88%±4.51%）明顯高于MDS患者（9.08%±3.59%）（P<0.05）；健康者外周血NK細(xì)胞占淋巴百分比（12.88%±4.51%）與低危及中危-ⅠMDS患者（13.71%±2.46%）相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；低危

9、及中危-ⅠMDS患者外周血NK細(xì)胞占淋巴細(xì)胞百分比（13.71%±2.46%）高于中危-Ⅱ及高危MDS患者（7.53%±2.36%）（P<0.05）。
　　3.健康者外周血CD34+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（0.03%±0.01%）明顯低于MDS患者（3.75%±3.12%）（P<0.05）；健康者外周血CD34+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（0.03%±0.01%）低于低危及中危-ⅠMDS患者（0.34%±0.36%）（P<0.05）；低危及中危-ⅠMDS患者

10、（0.34%±0.36%）低于中危-Ⅱ及高危MDS患者（4.88%±2.77%）（P<0.05）。
　　4.不同濃度的ART對MDS外周血來源的MDSCs、NK細(xì)胞、CD34+細(xì)胞的增殖和凋亡均未見明顯差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.MDS患者外周血循環(huán)中MDSCs和CD34+細(xì)胞比例均是升高的，且隨著疾病危險程度增加而增高；其NK細(xì)胞比例是降低的，并隨著疾病危險程度增加而降低。
　　2.ART對MD