生脈注射液對SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)多種造血相關(guān)因子的干預(yù)研究.pdf

1、目的：通過體外分離、培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)來鑒定其生物學(xué)特性，為進(jìn)一步研究及實(shí)際臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；探討生脈注射液對SD大鼠BMSCs增殖的影響，及生脈注射液對其分泌造血相關(guān)因子的影響，從而為生脈注射液在臨床血液病中的應(yīng)用提供有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：取SD大鼠股骨、脛骨骨髓，采用全骨髓貼壁分離篩選方法培養(yǎng)BMSCs，在顯微鏡下觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，并通過流式細(xì)胞儀技術(shù)鑒定BMSCs的生

2、物學(xué)特性。用四氮哇藍(lán)比色法(MTT比色法)檢測生脈注射液對BMSCs增殖的影響，Real Time-PCR方法檢測造血相關(guān)因子的表達(dá)及生脈注射液對造血相關(guān)因子表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：BMSCs在接種12～24小時(shí)后，大部分細(xì)胞能貼壁，隨時(shí)間延長，可見細(xì)胞出現(xiàn)集落式生長，呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞樣，流式細(xì)胞儀鑒定BMSCs表面標(biāo)志CD29陽性率為96.57％、CD44陽性率為93.63％，CD34陽性率為3.6％，CD45陽性率為12.3

3、％。有粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、血小板生成素(TPO)、干細(xì)胞因子(SCF)表達(dá)；加入不同濃度的生脈注射液與BMSCs共同培養(yǎng)24h、48h、72h后，MTT比色法檢測結(jié)果顯示：以含5μL/ml濃度的生脈注射液組48h增殖作用最明顯(P＜0.05)，證明含5μL/ml濃度的生脈注射液的培養(yǎng)液最適宜BMSCs增殖；RealTime-PCR分析顯示BMSCs可分泌GM-CSF、SCF、TPO，且GM-CSF、SCF的mR

4、NA表達(dá)量顯著高于對照組(P＜0.05)，TPO的mRNA表達(dá)量與對照組相比明顯下降，且以第九代下降最明顯，差異有顯著性(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、通過全骨髓貼壁分離篩選培養(yǎng)法可成功地從SD大鼠骨髓中分離到骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并能檢測出可表達(dá)多種造血相關(guān)因子。
　　 2、生脈注射液能促進(jìn)BMSCs體外增殖，并可以促進(jìn)BMSCs分泌GM-CSF、SCF，這可能揭示了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)造血的部分作用機(jī)