豬瘟病毒糖蛋白E2主要抗原域的原核表達(dá)、純化及抗血清的制備.pdf

1、山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文豬瘟病毒糖蛋白E2主要抗原域的原核表達(dá)、純化及抗血清的制備姓名：李叢叢申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：李云龍何成強(qiáng)20070526山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要豬瘟是～種傳播性很強(qiáng)、致死率極高的熱性傳染病之一，它是由豬瘟病毒(ck嚼icalswinefevervirus，CSFV)弓]起的，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴(yán)重的危害。CSFV是單股正鏈RNA病毒，屬于黃病毒科、瘟病毒屬，它的基因組編碼區(qū)可編碼5個(gè)結(jié)構(gòu)

2、蛋白和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白CSFV的膜囊糖蛋白E2是一種容易發(fā)生變異的蛋白，又是CSFV主要的保護(hù)性抗原蛋白，能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。豬瘟之所以廣泛流行卻難以徹底消滅，其分子水平上的一個(gè)重要原因是豬瘟病毒與自然界其他物種一樣不斷地選擇進(jìn)化，產(chǎn)生了基因多樣性本實(shí)驗(yàn)第一部分首先從Genbank中收集T23條CSFV的全基因組序列，對其種內(nèi)的同源重組現(xiàn)象進(jìn)行分析，找到了CSFV種內(nèi)存在同源重組的證據(jù)，進(jìn)而探討了cSFl，基因多樣性和進(jìn)化的機(jī)制；實(shí)

3、驗(yàn)的第二部分也是主體部分，利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了csFv糖蛋白E2的主要抗原域，經(jīng)過親和層析將此目的蛋白純化，然后免疫Ball3小鼠獲得E2糖蛋白的多克隆抗體，為進(jìn)一步制各單抗提供了前提。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容共分為兩章，具體步驟如下：1以23株來自全世界的豬瘟病毒全基因組的編碼序列為研究對象，首先利用臨近偶聯(lián)法(neighborjoining)做出23條序列的系統(tǒng)發(fā)生樹，然后通過SimPlot軟件進(jìn)行分析，找出哪個(gè)是疑似重組病毒以及它的兩條

4、疑似親本鏈為了進(jìn)一步證實(shí)上述分析得到的結(jié)果，以疑似重組病毒CSFV39為要求序列，利用Bootseaning程序，掃描兩條疑似親本鏈的基因組全序列，進(jìn)一步確定被提交的兩條鏈發(fā)生了同源重組，同對計(jì)算和推斷出同源重組發(fā)生的位點(diǎn)研究發(fā)現(xiàn)CSFV39是一個(gè)重組病毒，它的兩條疑似親本鏈?zhǔn)荂SFVShimen鏈和GXWZ02鏈。2設(shè)計(jì)兩對引物，以pMCl8CSFV為模版分別進(jìn)行PCR反應(yīng)，擴(kuò)增E2基因全長及E2基因上編碼主要抗原域的一個(gè)片段(該片段