河南PCV2的分離鑒定及Cap蛋白的表達(dá)與純化.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(Porcine Circovirus2，PCV2)能夠引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜和癥、豬皮炎腎病綜合征、豬先天性震顫、豬呼吸道病綜合征等多種傳染性疾病。近年來，PCV2在國內(nèi)和國外迅速傳播，隨著PCV2在各地廣泛的傳播并間歇式的爆發(fā)，PCV2引起的傳染病給畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來了很大的損害。因此，PCV2的診斷和預(yù)防也成為各國學(xué)者的研究重點(diǎn)。
　　為了篩選培育PCV2優(yōu)良毒株，本研究對來自河南省不同地區(qū)豬場的11份疑似斷奶仔

2、豬多系統(tǒng)衰竭綜和癥的病料進(jìn)行研磨處理，通過PCR檢測將檢測結(jié)果為陽性的病料研磨液接種PK-15細(xì)胞進(jìn)行病毒的篩選，通過IPMA進(jìn)一步確定病毒的增殖情況，將檢測結(jié)果為陽性的PCV2全基因組進(jìn)行克隆、測序，結(jié)果成功分離一株毒力較強(qiáng)的PCV2b。本研究成果為PCV2病毒株的篩選和全病毒滅活疫苗的制作及選擇提供依據(jù)。
　　為了建立一種快速、特異、精確的PCV2檢測方法，本試驗根據(jù)PCV2的核苷酸序列設(shè)計特異性引物，以陽性標(biāo)準(zhǔn)品為模板，建立

3、了一種SYBRGreen熒光定量PCR檢測豬圓環(huán)病毒2型的診斷方法。結(jié)果表明該方法的靈敏度高，達(dá)到3.0×102拷貝/mL。從溶解曲線分析其引物的特異性好，無引物二聚體，沒有交叉反應(yīng)，可重復(fù)性好，適合豬圓環(huán)病毒2型臨床樣品的檢測。
　　基于PCV2結(jié)構(gòu)蛋白(Capsid)能在體外自組裝成病毒樣顆粒(Virus-like particles，VLPs)的特性，我們采用原核表達(dá)系統(tǒng)的方法對重組的Cap蛋白進(jìn)行了可溶性表達(dá)，通過對表達(dá)條