生物活性水凝膠用于腫瘤干細(xì)胞篩選及治療的研究.pdf

1、癌癥是嚴(yán)重威脅人類生命健康的疾病之一，傳統(tǒng)治療方法未能徹底根除癌癥。究其原因是癌癥的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今尚未完全認(rèn)識(shí)。腫瘤干細(xì)胞理論的提出為腫瘤的發(fā)生、發(fā)展乃至術(shù)后復(fù)發(fā)提供了新的研究思路，同時(shí)也為癌癥的治療帶來(lái)了新的曙光。但由于腫瘤干細(xì)胞含量極低、分離困難，給腫瘤干細(xì)胞的研究帶來(lái)諸多不便。目前常用的分離方法為無(wú)血清培養(yǎng)法與流式分選法，但二者均存在一定的缺陷，因此亟須建立一種新型有效的分離方法。
　　腫瘤干細(xì)胞與普通干細(xì)胞有許多相似的

2、信號(hào)通路，因此可利用干細(xì)胞的微環(huán)境篩選分離分化程度較低的腫瘤干細(xì)胞。水凝膠由于其獨(dú)特的性質(zhì)，目前廣泛用于細(xì)胞的三維培養(yǎng)。有鑒于此，本研究利用水凝膠模擬普通干細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境篩選、富集腫瘤干細(xì)胞。通過(guò)探究細(xì)胞因子固定化，水凝膠彈性模量以及透明質(zhì)酸的比例，以小鼠乳腺癌細(xì)胞系4T1作為研究模型，將細(xì)胞克隆數(shù)量與直徑作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，最終獲得了最適的體系。
　　本研究利用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)與小鼠模型對(duì)腫瘤干細(xì)胞的干細(xì)胞特性進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)免疫熒光

3、技術(shù)對(duì)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD24，CD44以及MDR1進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明CD44表達(dá)上調(diào)，多藥耐藥蛋白MDR1表達(dá)同樣發(fā)生上調(diào)。利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)干細(xì)胞標(biāo)志物CD44，Sca-1，Nestin，Tert，Nanog以及Sox2，結(jié)果表明這些標(biāo)志物的表達(dá)均發(fā)生上調(diào)。最新研究表明，Dclk1作為腫瘤干細(xì)胞獨(dú)有的分子標(biāo)志物，可有效地將腫瘤干細(xì)胞與干細(xì)胞進(jìn)行區(qū)別，免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Dclk1的表達(dá)也發(fā)生上調(diào)。小鼠模型實(shí)驗(yàn)中，2000個(gè)腫瘤干

4、細(xì)胞可在5天內(nèi)快速在同源Balb/c小鼠皮下成瘤，而1000個(gè)腫瘤干細(xì)胞亦可在1周內(nèi)成瘤。結(jié)果表明，構(gòu)建的生物活性水凝膠能夠有效篩選、富集腫瘤干細(xì)胞。
　　課題組前期研究證實(shí)，抗Cripto-1封閉抗體在體內(nèi)或體外實(shí)驗(yàn)都表明可有效對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行逆轉(zhuǎn)治療，推測(cè)其亦對(duì)腫瘤干細(xì)胞有一定治療效果，因此初步研究抗Cripto-1封閉抗體對(duì)腫瘤干細(xì)胞治療效果。結(jié)果表明，抗Cripto-1單克隆抗體可有效降低腫瘤干細(xì)胞的存活率，并降其致瘤能力，