前列腺癌雄激素非依賴轉(zhuǎn)化中TRPV6對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌分化的影響.pdf

1、目的:
　　通過(guò)小干擾RNA(siRNA)技術(shù)沉默前列腺癌細(xì)胞中TRPV6基因,初步探討TRPV6對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖和侵襲力的影響及其在前列腺癌雄激素非依賴轉(zhuǎn)化過(guò)程中神經(jīng)內(nèi)分泌分化的作用。
　　方法:
　　(1)體外培養(yǎng)雄激素依賴性前列腺癌細(xì)胞(LNCaP)及雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞(PC-3),檢測(cè)兩種細(xì)胞中 TRPV6的表達(dá)情況。通過(guò) siRNA沉默TRPV6基因,檢測(cè)前列腺癌細(xì)胞中TRPV6基因的表達(dá),并篩選、

2、鑒定轉(zhuǎn)染穩(wěn)定的LNCaP細(xì)胞。
　　(2)選取轉(zhuǎn)染成功的LNCaP細(xì)胞并設(shè)定實(shí)驗(yàn)組(轉(zhuǎn)染siRNA-TRPV6)、陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染siRNA-NC)和空白對(duì)照組(只加轉(zhuǎn)染劑)三組進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn),通過(guò)MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖的影響及 Transwell檢測(cè)細(xì)胞侵襲力的變化情況,同時(shí)通過(guò)熒光定量PCR及western-Blot檢測(cè)神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的表達(dá)情況。
　　(3)利用 SPSS19.0軟件系統(tǒng)建立數(shù)據(jù)庫(kù)和進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分

3、析,對(duì)比研究TRPV6對(duì)前列腺癌LNCaP細(xì)胞生物學(xué)特征變化的作用。
　　結(jié)果:
　　1、熒光定量 PCR結(jié)果顯示:前列腺癌雄激素依賴性細(xì)胞株與前列腺癌雄激素非依賴性細(xì)胞株中均存在TRPV6基因的表達(dá),兩者之間表達(dá)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　2、轉(zhuǎn)染 TRPV6-siRNA后實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與陰性對(duì)照組及空白組相比,實(shí)驗(yàn)組的TRPV6呈現(xiàn)低表達(dá),且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。通過(guò)MTT、Transwell等

4、分子生物學(xué)方法檢測(cè)提示:與陰性對(duì)照組及空白組對(duì)比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖及侵襲力較其他二組均有抑制(P<0.05),而陰性對(duì)照組與空白組之間則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　3、熒光定量 PCR及 western-Blot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組中的神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)低于陰性對(duì)照組與空白組(P<0.05),而陰性對(duì)照組與空白組的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),提示TRPV6與前列腺癌雄激素非依賴轉(zhuǎn)化中的神經(jīng)內(nèi)分泌分化存在一定程度正相關(guān)