通脈大生片對大鼠卵巢顆粒細(xì)胞TGF-β1-smads通路影響的研究.pdf

1、目的:
　　在前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞為載體，研究通脈大生片對大鼠卵巢顆粒細(xì)胞TGF-β/Smads信號傳導(dǎo)通路的影響，證實(shí)通脈大生片是作用于該通路，促進(jìn)卵泡的發(fā)育，而達(dá)到治療排卵障礙性不孕的目的，進(jìn)一步明確通脈大生片的作用機(jī)制，從而為補(bǔ)腎中藥的新藥研究奠定實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。
　　方法:
　　將體外培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含青霉素(100IU/L)和鏈霉素(100μg/L)的DM

2、EM/F12培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中加入10％胎牛血清，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。隨機(jī)分為五組:正常組、通脈大生片高劑量組（簡稱通高組）、通脈大生片中劑量組（簡稱通中組）、通脈大生片低劑量組（簡稱通低組）、FSH組，分別于細(xì)胞生長對數(shù)期給予相應(yīng)的藥物干預(yù)，取給藥后1h、2h、6h、12h、24h、48h細(xì)胞培養(yǎng)上清液，用酶聯(lián)免疫法（ELISA法）檢測用藥后不同組別、不同時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)化生長因子β1及其受體(TGF-β1、TGF-β1R)

3、的表達(dá)量;正常組與通脈大生片各劑量組分別取給藥后6h、12h、24h的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞爬片，F(xiàn)SH組取給藥后1h、2h、6h的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞爬片，用甲醛固定后，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)SP法檢測其Smad3、Smad4、Smad7的表達(dá)量，運(yùn)用SPSS13.0軟件分析數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果:
　　1、正常組各時(shí)間點(diǎn)的TGF-β1、TGF-β1R表達(dá)量無明顯改變;通脈大生片各劑量組的TGF-β1、TGF-β1R表達(dá)量均于給藥后12h達(dá)

4、高峰，且以通中組最高(P＜0.05)，之后開始下降，48h時(shí)降到最低;FSH組TGF-β1、TGF-β1R表達(dá)量于給藥后2h達(dá)高峰，之后開始下降，48h時(shí)降到最低。通中組峰值與FSH組峰值比較無明顯差異(P＞0.05)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、正常組各時(shí)間點(diǎn)Smad3的核陽性率無明顯變化，通脈大生片各劑量組Smad3的核陽性率于給藥后12h的核陽性率最高，且以通中組最高(P＜0.05)，F(xiàn)SH組Smad3的核陽性率于給藥后2h的表

5、達(dá)量最高。通中組Smad3的核陽性率峰值與FSH組比較無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　13、正常組各時(shí)間點(diǎn)Smad4的核陽性率無明顯變化，通脈大生片各劑量組Smad4的核陽性率于給藥后12h的表達(dá)量最高，且以通中組最高(P＜0.05)，F(xiàn)SH組Smad4的核陽性率于給藥后2h的表達(dá)量最高。通中組Smad3的核陽性率峰值與FSH組比較無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4、正常組各時(shí)間點(diǎn)Smad7的

6、核陽性率無明顯變化，通脈大生片各劑量組Smad3的核陽性率于給藥后12h的陽性率最低，隨后一直保持最低水平，且以通高組最低(P＜0.05)，F(xiàn)SH組Smad7的核陽性率于給藥后2h的表達(dá)量最低，之后一直保持低水平。FSH組的Smad7核陽性率最低值低于通中組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、通脈大生片可增加大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的TGF-β1、TGF-β1R的表達(dá)量，
　　2、通脈大生片可上調(diào)大鼠卵巢顆粒