輸精管結(jié)扎引起大鼠生殖細胞凋亡機制初探.pdf

1、在成年動物睪丸中,生理性的細胞凋亡在精子生成過程的各個時期都有發(fā)生,然而異常的生殖細胞凋亡則會導致雄性不育。各種外界因素如輻射、激素、化學藥物等作用于睪丸,會使得細胞凋亡增加進而導致病理性的生殖細胞缺失。事實上,環(huán)境中的毒物和化學藥物對生殖系統(tǒng)的影響已成為目前青年人精子缺乏的一個重要原因,并且人們采用放射療法和化學療法治療癌癥也會誘導生殖細胞凋亡進而導致不育。因此,研究睪丸生殖細胞凋亡機制,進一步探索促進成年個體生殖細胞存活的途徑和方法

2、已成為當務之急。本實驗研究輸精管結(jié)扎(1～9天)對大鼠睪丸功能的影響,以及生殖細胞的凋亡是否與FasL/Fas系統(tǒng)有關,分析生殖細胞凋亡的途徑,進而初步探討睪丸生殖細胞凋亡機制。 實驗通過建立大鼠輸精管結(jié)扎模型,設立正常對照組、假手術組、手術處理組。于手術后3天、5天、7天、9天分別采用睪丸指數(shù)、組織學觀察、脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導的dUTP的缺口末端標記技術(TUNEL)對睪丸的功能、曲細精管結(jié)構及生殖細胞凋亡狀態(tài)進行觀察；

3、同時,采用實時熒光定量PCR(real-time quantitive PCR)對FasL/Fas的mRNA水平進行檢測。 檢測結(jié)果顯示：1)輸精管結(jié)扎各組與對照組相比(包括相應假手術組及未處理組),睪丸指數(shù)沒有明顯變化；組織形態(tài)學顯示,手術后第5天輸精管結(jié)扎組的睪丸出現(xiàn)曲細精管的生精上皮內(nèi)有零星的空泡,在鄰近基底膜處的精母細胞有不同程度的脫落,管腔內(nèi)的成熟精子數(shù)量有明顯的減少,這一現(xiàn)象在手術處理后第7天更為明顯。2)TUNEL

4、染色顯示,輸精管結(jié)扎3天、5天、7天、9天的各組睪丸均可見大量的細胞凋亡,主要是位于基底部的初級精母細胞。生殖細胞凋亡隨著輸精管結(jié)扎時間的延長而加強,在第7天達到凋亡高峰,隨后有所下降。3)實時熒光定量PCR顯示,輸精管結(jié)扎組與相應假手術組相比,FasL/Fas的mRNA水平未見顯著變化。 實驗結(jié)果表明,輸精管結(jié)扎(1～9天)引起睪丸生殖細胞大量凋亡,生殖細胞凋亡的途徑機制似乎與FasL/Fas分子無關,至于具體的途徑和機制調(diào)控