人低分子量雙特異性磷酸酶基因LMW-DSP2、LMW-DSP3的克隆與功能研究.pdf

1、雙特異性磷酸酶能夠使磷酸化的酪氨酸殘基和絲/蘇氨酸殘基去磷酸化,在有絲分裂、信號(hào)傳導(dǎo)、胞外刺激和細(xì)胞周期等通路中發(fā)揮重要作用.通過(guò)大規(guī)模人類(lèi)cDNA測(cè)序,我們從胎腦cDNA文庫(kù)中克隆了兩條低分子量的雙特異性磷酸酶基因.我們對(duì)兩條雙特異性磷酸酶基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析和功能研究.其中LMW-DSP2的cDNA具有1037個(gè)堿基,擬編碼的蛋白具有184個(gè)氨基酸,具有一個(gè)雙特異性磷酸酶的催化結(jié)構(gòu)域.蛋白產(chǎn)物的分子量為20.9kDa,等電點(diǎn)為8

2、.09.LMW-DSP2與小鼠中的同源蛋白具有96.7％的同源度.LMW-DSP2基因定位于6p22,該區(qū)段的染色體異常與多種白血病、間皮瘤、腺癌、淋巴瘤,骨髓瘤有關(guān).LMW-DSP2基因具有8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子,所有外顯子與內(nèi)含子的接頭都符合AG-GT規(guī)則,在染色體上跨度58kb.LMW-DSP2同源的EST,它們分布于胎盤(pán)、肺、腦、胰腺、腸、睪丸、骨髓、皮膚、子宮、乳房等組織.Northern Blot結(jié)果顯示LMW-DSP2在心

3、臟,骨骼肌和胰臟中有表達(dá),檢測(cè)到1.8kb,2.0kb,4.0kb,三個(gè)轉(zhuǎn)錄本.4.0kb在心臟,骨骼肌和胰臟均有表達(dá);1.8kb在心臟和胰臟中表達(dá);而2.0kb僅在骨骼肌中表達(dá).LMW-DSP3基因cDNA具有1444個(gè)堿基,擬編碼的蛋白具有217個(gè)氨基酸.該蛋白具有雙特異性磷酸酶的催化結(jié)構(gòu)域,但沒(méi)有CDC25同源結(jié)構(gòu)域,是一個(gè)低分子量的雙特異性磷酸酶.蛋白分子量是24.2kDa,等電點(diǎn)是6.36,與小鼠LMW-DSP3具有84％的同

4、源度.LMW-DSP3基因定位于2q32,該區(qū)域與骨髓瘤,貧血癥,淋巴瘤,白血病等疾病相關(guān).LMW-DSP3具有5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子,在染色體上跨度21kb.Northern Blot結(jié)果沒(méi)有特異條帶,RT-PCR結(jié)果顯示LMW-DSP3在心、肺、肝和胰腺中有表達(dá),其中在胰腺的表達(dá)量最高.LMW-DSP3在L0-2正常肝細(xì)胞和SMMC-7721肝癌細(xì)胞中有表達(dá),而在肝癌細(xì)胞BEL-7402和QGY-7701中沒(méi)有表達(dá).6His-LMW

5、-DSP3的表達(dá)產(chǎn)物形成包涵體,未能獲得可溶蛋白.GST-LMW-DSP3融合蛋白具有對(duì)pNPP的磷酸酶活性,其最適pH值是7.0,最適溫度是37℃,LMW-DSP3的磷酸酶活性不依賴于二價(jià)陽(yáng)離子,Ca<'2>和Mn<'2>對(duì)磷酸酶活性具有輕微的促進(jìn)作用.釩酸鈉能夠完全抑制LMW-DSP3的磷酸酶活性.通過(guò)酵母雙雜交篩選人類(lèi)胎腦文庫(kù),發(fā)現(xiàn)LMW-DSP3蛋白與一個(gè)具有TB2-DP1-HVA22結(jié)構(gòu)域的蛋白具有相互作用.LMW-DSP3蛋