組織工程化生物角膜構(gòu)建方法的比較研究.pdf

1、目的：探討構(gòu)建組織工程化生物角膜更有效、更方便的方法。方法1.以組織塊培養(yǎng)法、酶消化法擴(kuò)增的角膜緣干細(xì)胞為種子細(xì)胞，以去上皮羊膜、板層角膜切削刀制作的異種角膜基質(zhì)和高分子材料PET為載體，利用細(xì)胞培養(yǎng)池體外構(gòu)建板層角膜組織，通過HE染色、掃描電鏡、透射電鏡等觀察構(gòu)建組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，檢驗細(xì)胞培養(yǎng)池條件下進(jìn)行構(gòu)建板層生物角膜的可能性；2.以組織塊培養(yǎng)法擴(kuò)增的角膜緣干細(xì)胞為種子細(xì)胞，以高分子材料PET為載體，利用細(xì)胞培養(yǎng)池、灌注培養(yǎng)系統(tǒng)、旋轉(zhuǎn)

2、培養(yǎng)系統(tǒng)體外構(gòu)建板層生物角膜，并通過HE染色、Hoechst33342、Propidiumiodide熒光染色、掃描電鏡、透射電鏡等觀察所構(gòu)建組織的細(xì)胞排列方式與形態(tài)結(jié)構(gòu)；免疫組化、RT-PCR檢測所構(gòu)建組織的p63及K3/K12表達(dá)；pH計測定三種培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)液pH值的變化，比較三種構(gòu)建方法的條件穩(wěn)定性、及所構(gòu)建組織的差別。結(jié)論：1.原代或早代細(xì)胞較適合選作種子細(xì)胞，用于角膜組織構(gòu)建，組織塊培養(yǎng)法比酶消化法擴(kuò)增角膜緣干細(xì)胞的效率更高；

3、2.去上皮羊膜、MLK刀制作的板層角膜基質(zhì)、PET膜適合作為構(gòu)建角膜的載體；3.細(xì)胞培養(yǎng)池具有透明的PET膜，多孔的結(jié)構(gòu)保證營養(yǎng)物質(zhì)自由通過，在構(gòu)建角膜組織時可以較好地模擬體內(nèi)微環(huán)境；4.細(xì)胞培養(yǎng)池、灌注培養(yǎng)系統(tǒng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)系統(tǒng)三種方法均可構(gòu)建出健康的復(fù)層角膜上皮組織，構(gòu)建組織K3/K12的mRNA、蛋白質(zhì)表達(dá)差別不大，但是細(xì)胞排列方式，細(xì)胞與載體結(jié)合的緊密程度存在差別；5.灌注培養(yǎng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)過程中切應(yīng)力對于構(gòu)建組織的細(xì)胞骨架的影響，構(gòu)建