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1、背景:Survivin特異地在腫瘤組織中過(guò)表達(dá),尤其在膠質(zhì)瘤中高表達(dá)。許多報(bào)道表明抑制它的功能對(duì)腫瘤治療有利。RNA干擾被證明是一項(xiàng)能有效而特異地抑制基因表達(dá)的新技術(shù),目前已成為腫瘤基因治療研究的熱點(diǎn)。 目的:利用RNA干擾(RNAi)技術(shù),以survivin為靶基因,設(shè)計(jì)構(gòu)建siRNA表達(dá)質(zhì)粒,進(jìn)行測(cè)序鑒定,并檢測(cè)該表達(dá)質(zhì)粒對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞survivin基因表達(dá)的影響,為進(jìn)一步研究survivin基因在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用以及
2、以survivin為靶點(diǎn)的膠質(zhì)瘤的治療奠定基礎(chǔ)。 方法:1.設(shè)計(jì)具有短發(fā)夾結(jié)構(gòu)的兩條DNA序列,經(jīng)退火成互補(bǔ)雙鏈,再克隆至載體pSilencer3.1-H1-hygro中構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化DH5α菌株,經(jīng)菌落PCR鑒定后,提取質(zhì)粒行酶切鑒定,并進(jìn)行序列測(cè)定。 2.利用構(gòu)建成功的siRNA表達(dá)質(zhì)粒,通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87細(xì)胞,并通過(guò)RT-PCR、Westernblot檢測(cè)細(xì)胞中survivinmRNA和蛋白的
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