愈腎顆粒對腎纖維化模型大鼠影響機制的實驗研究.pdf

1、腎纖維化是指由多種原因引起的細(xì)胞外基質(zhì)成分在腎間質(zhì)內(nèi)過度沉積。積聚在腎間質(zhì)的細(xì)胞外基質(zhì)成分復(fù)雜，既包括正常腎間質(zhì)已有的基質(zhì)蛋白成分的增多，還包括正常時僅存在腎小管基膜的基質(zhì)蛋白的沉積。腎纖維化幾乎是各種腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎衰竭的共同途徑和主要病理基礎(chǔ)。近年大量研究表明，腎小管間質(zhì)纖維化程度預(yù)示著腎功能受損的程度，決定慢性腎臟病患者的預(yù)后。因此，臨床尋找有效的中藥阻止腎纖維化，延緩腎功能衰竭有重要意義。研究目的： 本實驗研究運用

2、生化、病理形態(tài)學(xué)、免疫組織化學(xué)、分子生物學(xué)以及計算機圖像分析儀技術(shù)半定量評價等多角度、多靶點探討中藥復(fù)方愈腎顆粒改善腺嘌呤灌胃復(fù)制大鼠腎纖維化模型有效性及作用機理的研究，并為探尋中醫(yī)藥治療腎纖維化提供實驗依據(jù)，為今后指導(dǎo)臨床提供新的思路和方法。 材料與方法： 1.腺嘌呤灌胃復(fù)制大鼠腎纖維化模型及分組治療：70只wistar大鼠，雌雄各半，體重200±20克。將大鼠按體重隨機分為4組，分別為：正常組、模型組、愈腎顆粒組、洛

3、汀新組。每組12只，實驗過程中分別于21d、28d、42d三個時間點收集大鼠腎臟組織及血清標(biāo)本。 2.24小時尿蛋白及血清BUN、SCr：采用考馬斯亮蘭法測定尿蛋白定量。用全自動生化分析儀檢測血清BUN、SCr水平。 3.腎纖維化的組織學(xué)評價指標(biāo)：將病變的腎組織使用20％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片，經(jīng)HE、Masson染色后依據(jù)腎小管擴(kuò)張、萎縮，間質(zhì)纖維化及炎性細(xì)胞浸潤程度等來觀察腎間質(zhì)病理改變。 4.運用免疫組

4、化方法，進(jìn)行半定量分析，檢測HGF、BMP-7、CTGF在腎組織表達(dá)和分布趨勢。 5.運用RT-PSCR法，檢測CTGFmRNA相對表達(dá)量。 結(jié)果： 1.愈腎顆粒能夠明顯改善腺嘌呤灌胃復(fù)制腎纖維化大鼠模型腎組織的病理損傷，具有保護(hù)和修復(fù)腎臟組織，延緩腎纖維化進(jìn)程的作用。 2.愈腎顆粒能夠增強腺嘌呤灌胃復(fù)制腎纖維化大鼠模型腎組織中HGF的表達(dá)及分布，具有延緩腎纖維化進(jìn)程的作用。 3.愈腎顆粒能夠增強

5、腺嘌呤灌胃復(fù)制腎纖維化大鼠模型腎組織中.BMP-7的表達(dá)及分布，具有延緩腎纖維化進(jìn)程的作用。 4.愈腎顆粒明顯抑制腺嘌呤灌胃復(fù)制腎纖維化大鼠模型腎組織中CTGF及CTGF.mRNA的表達(dá)，CTGF可作為評價腎纖維化病變程度的良好指標(biāo)及防治的新的靶點，指導(dǎo)臨床治療。 結(jié)論： 本實驗結(jié)果表明，愈腎顆?？赡芡ㄟ^增強腎纖維化大鼠模型腎組織中HGF、BMP-7的表達(dá)及分布、抑制CTGF及CTGFmRNA的表達(dá)等作用機理而延