PDGF-BB誘導(dǎo)下不同細(xì)胞外基質(zhì)成分對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞生物力學(xué)特性的影響.pdf

1、長期重度哮喘氣道中，存在著氣道結(jié)構(gòu)的改變即氣道重構(gòu)的現(xiàn)象。平滑肌增生肥厚和氣道壁細(xì)胞外基質(zhì)的異常沉積等是氣道重構(gòu)中的主要結(jié)構(gòu)改變。氣道平滑肌與周圍環(huán)境中細(xì)胞外基質(zhì)（Extraellular matrix,ECM）之間的相互作用影響以及與其它因素如炎癥因子、生長因子的復(fù)雜交錯(cuò)作用很可能進(jìn)一步參與了哮喘中的氣道重構(gòu)及氣道高反應(yīng)。許多體外研究實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ECM成分不僅能調(diào)節(jié)體外培養(yǎng)的氣道平滑肌細(xì)胞（Airway smooth muscle cel

2、ls,ASMCs）的合成、增生、遷移，而且也能通過生物、化學(xué)信號(hào)途徑影響平滑肌的表性和功能。并且來自于哮喘患者的氣道平滑肌細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)成分也與正常健康者不同。但ECM異常沉積如何參與調(diào)節(jié)氣道平滑肌的功能以及他們與氣道高反應(yīng)、氣道重構(gòu)的確定關(guān)系至今還不清楚。
　　本文主要是研究層粘蛋白（Laminin,LN）、纖維連接蛋白（Fibronectin,FN）、I型膠原（Collagen I,ColI）三種不同ECM蛋白對(duì)血小板生長

3、因子（Platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB）誘導(dǎo)的大鼠ASMCs生物力學(xué)特性變化的影響。這為明確哮喘中氣道組織重構(gòu)、炎癥反應(yīng)與氣道高反應(yīng)之間的相互作用，提供了指導(dǎo)和借鑒意義。
　　本文具體的研究內(nèi)容分為如下幾個(gè)部分：
　　1.大鼠ASMCs的原代培養(yǎng)及鑒定：本實(shí)驗(yàn)中采用了組織塊貼壁法培養(yǎng)了原代的ASMCs。相差顯微觀察第三代的ASMCs表現(xiàn)“波峰－波谷”的生長特征。用免疫組織化學(xué)

4、的方法對(duì)ASMCs的sm-α-actin進(jìn)行染色鑒定，發(fā)現(xiàn)所培養(yǎng)的ASMCs陽性表達(dá)α-actin在95％以上，證明所培養(yǎng)的ASMCs純度較高。
　　2.PDGF-BB誘導(dǎo)下不同細(xì)胞外基質(zhì)成分對(duì)ASMCs形態(tài)的影響：采用顯微圖像方法觀測(cè)細(xì)胞形態(tài)和寬長比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：相比較不含PDGF-BB的無血清培養(yǎng)基，在有PDGF-BB的培養(yǎng)條件下，ASMCs形態(tài)總體上變細(xì)變長，細(xì)胞長軸明顯延長，即細(xì)胞寬長比減小，但附著在LN上的ASMCs比附著

5、在ColI或FN上的細(xì)胞寬長比相對(duì)要大（P<0.01）。
　　3.PDGF-BB誘導(dǎo)下不同細(xì)胞外基質(zhì)成分對(duì)ASMCs力學(xué)特性的影響：采用光學(xué)磁微粒扭轉(zhuǎn)細(xì)胞測(cè)量方法（OMTC）測(cè)量細(xì)胞受KCl或組胺（Histamine）刺激時(shí)的收縮反應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：ASMCs對(duì)KCl刺激的收縮響應(yīng)隨培養(yǎng)時(shí)間增加而增加（P<0.01），但不受ECM蛋白成分的影響。而在有PDGF-BB的培養(yǎng)條件下，ASMCs對(duì)KCl或Histamine刺激的收縮響應(yīng)總體