胎盤性激素結(jié)合球蛋白的表達(dá)與妊娠期糖尿病的關(guān)系及意義.pdf

1、目的：本研究采用免疫組織化學(xué)方法和免疫電鏡方法檢測SHBG在GDM組和正常胎盤組織中的表達(dá)部位及表達(dá)差異，了解胎盤SHBG在GDM時(shí)存在的變化趨勢，結(jié)合孕婦血糖、總膽固醇、甘油三酯等GDM危險(xiǎn)因素，探討胎盤部位的SHBG的表達(dá)與GDM的關(guān)系，為GDM發(fā)病機(jī)制的研究提供新的思路與途徑。 方法：①剖宮產(chǎn)或自然分娩時(shí)胎盤娩出后，立即取臍帶附著處相對(duì)母體面1.0cm×1.0cm×1.0cm大小絨毛組織，冷生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干后置于

2、10％中性甲醛溶液中固定，常規(guī)石蠟包埋。4μm連續(xù)組織切片，分別做HE染色和免疫組織化學(xué)染色；14μm連續(xù)組織切片做免疫電鏡。產(chǎn)前取清晨空腹靜脈血2ml送我院檢驗(yàn)科，測定空腹血糖、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白—膽固醇、低密度脂蛋白—膽固醇。胎兒娩出后常規(guī)測量體重。②應(yīng)用Envision免疫組織化學(xué)染色方法觀察SHBG在GDM及正常足月孕婦胎盤中是否表達(dá)及其表達(dá)差異。③光鏡下觀察SHBG主要在胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞膜及細(xì)胞漿中表達(dá)。免疫

3、組化結(jié)果由兩位觀察者采用盲法每個(gè)病例隨機(jī)選擇5個(gè)有代表性的高倍視野，按照陽性細(xì)胞數(shù)占同類細(xì)胞數(shù)的比例，進(jìn)行等級(jí)劃分。結(jié)果采用半定量計(jì)分法判定，以染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞的百分比的乘積作為半定量標(biāo)準(zhǔn)。即按陽性著色程度評(píng)分，0分為無色；1分為黃色；2分為棕黃色；3分為棕褐色(深淺與背景色相對(duì)比)；著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率≤5％為0分，6％～25％為1分，26％～50％為2分，51％～74％為3分，≥75％為4分。將每張切片平均著色程度得分與平均著

4、色細(xì)胞百分率得分各自相乘，為其最后得分：0分為陰性(-)；1～4分為弱陽性(+)；5～8分為中度陽性(++)；9～12分為強(qiáng)陽性(+++)。④應(yīng)用SPSS13.0軟件包對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，兩組臨床相關(guān)資料數(shù)據(jù)對(duì)比除了對(duì)孕次、產(chǎn)次的分析，其余樣本均應(yīng)用Student's T檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)方法；孕次、產(chǎn)次(呈非正態(tài)分布)，胎盤SHBG強(qiáng)度比較均用非參數(shù)的Mann—Whitney U檢驗(yàn)(兩組等級(jí)資料秩和檢驗(yàn))的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法；相關(guān)性用Spearma

5、nrank相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：⑴SHBG在GDM及對(duì)照組胎盤組織中均表達(dá)于胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中。電鏡下觀察合體滋養(yǎng)細(xì)胞中出現(xiàn)電子密度高的免疫復(fù)合物顆粒，呈片狀或點(diǎn)狀分布于細(xì)胞內(nèi)，主要位于細(xì)胞表面微絨毛、細(xì)胞膜及細(xì)胞漿中。空白對(duì)照組即免疫組化過程中PBS代替一抗組，合體滋養(yǎng)細(xì)胞未見明顯免疫反應(yīng)陽性的電子密度高的免疫復(fù)合物顆粒。⑵SHBG在GDM胎盤中的陽性表達(dá)率(25/30，83.3％

6、)顯著低于對(duì)照組正常胎盤陽性表達(dá)率(28/30，93.3％)差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=—3.541，P<0.01)。⑶GDM組胎盤SHBG的表達(dá)水平與血糖(rs=-0.842，P<0.01)呈負(fù)相關(guān)，對(duì)照組胎盤SHBG的表達(dá)水平與血糖(rs=-0.579，P<0.01)呈負(fù)相關(guān)，兩組合并后胎盤SHBG的表達(dá)水平與血糖(rs=-0.758，P<0.01)呈負(fù)相關(guān)。GDM組與對(duì)照組胎盤SHBG表達(dá)水平與新生兒體重(GDM組：rs=0.01

7、4，P=0.94；對(duì)照組：rs=-0.093，P=0.626)總膽固醇(GDM組：rs=0.038，P=0.841；對(duì)照組：rs=0.187，P=0.323)甘油三酯(GDM組：rs=0.144，P=0.488；對(duì)照組：rs=0.105，P=0.580)高密度脂蛋白—膽固醇(GDM組：rs=0.036，P=0.849；對(duì)照組：rs=0.170，P=0.370)低密度脂蛋白—膽固醇(GDM組：rs=-0.123，P=0.518；對(duì)照組：r

8、s=0.256，P=0.172)無明顯相關(guān)性。兩組合并后胎盤SHBG表達(dá)水平與新生兒體重(rs=0.101，P=0.440)總膽固醇(rs=0.122，P=0.352)甘油三酯(rs=-0.022，P=0.865)高密度脂蛋白—膽固醇(rs=0.193，P=0.140)低密度脂蛋白—膽固醇(rs=0.177，P=0.177)均無明顯相關(guān)性。⑷GDM組血糖(5.87±1.53 mmol/L)、甘油三酯(4.26±2.15 mmol/L)新

9、生兒體重(3852.33±923.61 g)均高于對(duì)照組血糖(4.39±0.55 mmol/L)、甘油三酯(3.05±1.03 mmol/L)、新生兒體重(3470.67±445.72 g)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01、P<0.01、P<0.05)。GDM組高密度脂蛋白—膽固醇(1.63±0.36 mmol/L)、低密度脂蛋白—膽固醇(2.26±0.92 mmol/L)均低于對(duì)照組高密度脂蛋白—膽固醇(1.91±0.46 mmol/L

10、)、低密度脂蛋白—膽固醇(2.87±1.00 mmol/L)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05、P<0.05)。 結(jié)論：①胎盤組織中存在SHBG的表達(dá)，光鏡下觀察主要表達(dá)在胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿。電鏡下合體滋養(yǎng)細(xì)胞中出現(xiàn)電子密度高的顆粒，呈片狀或點(diǎn)狀分布于細(xì)胞內(nèi)，主要位于合體滋養(yǎng)細(xì)胞表面微絨毛、細(xì)胞膜及細(xì)胞漿中，與光鏡下觀察結(jié)果相一致。②GDM組胎盤組織SHBG表達(dá)水平低于對(duì)照組，可能提示SHBG的表達(dá)同樣受到GDM病理狀