地黃、蘇合香對大鼠早期肝性腦病的神經(jīng)保護作用.pdf

1、肝性腦病(Hepatic encephalopathy, HE)是由肝臟功能嚴重障礙引起的以代謝紊亂為基礎(chǔ)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)綜合征。患者的主要臨床表現(xiàn)包括性格和睡眠-清醒循環(huán)改變，認知功能障礙和運動狀態(tài)的改變等。HE的病因很多，但最終后果是以氨為主的多種毒性物質(zhì)在血內(nèi)的聚集、假性神經(jīng)遞質(zhì)生成、氨基酸比例失衡、γ-氨基丁酸/苯二氮卓(GABA/BZ)受體增多等。目前公認氨中毒仍是HE發(fā)病機制的主要因素，高血氨可使腦內(nèi)一些神經(jīng)遞質(zhì)濃度發(fā)

2、生變化，干擾神經(jīng)遞質(zhì)間平衡，因而導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能紊亂。血氨可激活外周型苯二氮卓受體PBRs，增加其結(jié)合位點，刺激神經(jīng)激素產(chǎn)生，這些神經(jīng)激素能擴大GABA的作用。近期一些研究還表明，高血氨和炎癥反應(yīng)共同作用引起HE認知功能障礙。
　　 目前，HE的發(fā)病機制仍不十分明確，對HE的治療亦缺乏有效手段，雖然有許多西藥用于臨床治療肝性腦病，但主要還是仿制國外產(chǎn)品，尚存在著適應(yīng)不良和副作用，因此，越來越多的研究將重點轉(zhuǎn)移到中草藥，原因

3、是中草藥來源于天然，比合成藥物更安全。而且中草藥的成分復(fù)雜，對于病理機制復(fù)雜的疾病，可能具有更好的療效。此外，中草藥的代謝譜對于藥物活性成分篩選具有重要價值，為藥物的研發(fā)及作用機制闡述提供了線索。在本研究中，我們將地黃、蘇合香提取物(Rehmannia&storesin extracts，RS，以下簡稱地蘇合劑)用于治療四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的HE大鼠，同時使用乳果糖(Lactulose)作為陽性對照藥，觀察RS治療是否能對早期HE大

4、鼠模型起到神經(jīng)保護作用，在整體水平評價RS的治療效果，并探討其作用機制，為開發(fā)安全有效的防治HE的新藥提供依據(jù)。
　　 1.地蘇合劑是一種含有多種成分的混合物。其中具有芳香開竅作用的蘇合香，其主要成分由高效液相色譜(high performance liquid chromatography, HPLC)顯示。
　　 2.成年Wistar大鼠隨機分為6組(n=10×6):(1)對照組(Control);(2)模型組(Mo

5、del);(3)陽性藥乳果糖組(Lactulose)(6g/kg，i.g.);(4)地蘇合劑低劑量(RS-L)組（地黃提取物0.5g/kg+蘇合香0.008g/kg，i.g.）;(5)地蘇合劑中劑量組(RS-M)（地黃提取物1g/kg+蘇合香0.016g/kg，i.g.）;(6)地蘇合劑高劑量組(RS-H)（地黃提取物2g/kg+蘇合香0.032g/kg，i.g.）。除正常對照組外，其余組采用經(jīng)典的CCl4誘發(fā)肝纖維化模型(50％ CC

6、l41ml/kg，i.g.)，每周2次，連續(xù)12周。
　　 3.實驗過程中大鼠每周測體重一次，實驗結(jié)束時模型組大鼠體重明顯低于對照組（P＜0.01），經(jīng)過陽性藥和地蘇合劑治療后，乳果糖組和RS-H組大鼠的體重與模型組相比有明顯改善(P＜0.05）。
　　 4.行為學(xué)實驗結(jié)果顯示:①模型組大鼠自發(fā)運動總距離較對照組顯著減少(P＜0.01)，乳果糖組(P＜0.01）和RS-H組(P＜0.05）明顯改善;模型組大鼠自發(fā)運動跨格

7、次數(shù)較對照組顯著減少(P＜0.01），乳果糖組（P＜0.05）明顯改善，RS組的跨格次數(shù)較模型組增加，但并無統(tǒng)計學(xué)差異;模型組大鼠在中心場的停留時間較對照組顯著縮短(P＜0.01），RS-H組大鼠在中心場的停留時間明顯延長（P＜0.05）;模型組大鼠直立次數(shù)較對照組顯著減少（P＜0.01），乳果糖和RS治療后直立次數(shù)增加，但無統(tǒng)計學(xué)差異。②Morris水迷宮實驗中，在連續(xù)訓(xùn)練的幾天內(nèi)，隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，各組動物的尋臺潛伏期縮短。末次實

8、驗中，模型組大鼠尋臺潛伏期較對照組顯著延長(P＜0.01)，乳果糖治療組和RS-H組大鼠尋臺潛伏期較模型組明顯縮短(P＜0.05）;模型組大鼠游泳速度減慢，但差異沒有達到統(tǒng)計學(xué)意義。模型組大鼠在十字高架迷宮實驗中進入開放臂的次數(shù)與對照組相比顯著減少(P＜0.05)，乳果糖和RS治療后進入開放臂次數(shù)增加，但無統(tǒng)計學(xué)差異;模型組大鼠進入開放臂的時間與對照組相比減少，但各組間無統(tǒng)計學(xué)差異。與對照組相比，模型組大鼠的Y迷宮正確選擇率有所下降，但

9、未達到統(tǒng)計學(xué)差異標準。以上實驗證明RS可以增加HE大鼠自發(fā)活動，改善其學(xué)習(xí)記憶能力。
　　 5.實驗結(jié)束后各組大鼠肝臟濕重與對照組相比所得肝指數(shù)，模型組大鼠較對照組顯著降低(P＜0.01），乳果糖治療組、RS-M組和RS-H組大鼠肝指數(shù)較模型組明顯升高(P＜0.05);模型組大鼠脾指數(shù)較對照組顯著升高(P＜0.01)，RS-M組大鼠脾指數(shù)較模型組明顯降低(P＜0.05）。
　　 6.生化學(xué)檢測結(jié)果顯示:模型組大鼠ALT、

10、Amm、NO、TNOS和iNOS水平較對照組均顯著升高(P＜0.01)，乳果糖組和RS組大鼠ALT、Amm、TNOS和iNOS水平較模型組明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)。模型組大鼠血清AST水平有所升高，但未達到統(tǒng)計學(xué)差異標準。模型組大鼠總蛋白水平較對照組顯著降低(P＜0.05），其余各組間無統(tǒng)計學(xué)差異。模型組大鼠白蛋白水平較對照組顯著降低(P＜0.01)，乳果糖組和RS治療組大鼠白蛋白水平較模型組有不同程度的升高。
　　

11、 7.ELISA結(jié)果顯示:模型組大鼠TNF-α水平較對照組顯著升高(P＜0.01)，乳果糖組(P＜0.01)、RS-M組(P＜0.05）和RS-H組(P＜0.01)大鼠TNF-α水平較模型組明顯降低。
　　 8.受體活性檢測結(jié)果顯示:模型組大鼠PBRs和NMDA受體的結(jié)合位點均顯著增加，Bmax值較對照組明顯升高(P＜0.01)，乳果糖組和RS-H組大鼠Bmax值較模型組明顯降低(P＜0.01)。
　　 9.形態(tài)學(xué)結(jié)果

12、顯示:肝臟HE染色提示，模型組大鼠可見肝硬化表現(xiàn)。乳果糖組及RS治療組大鼠肝細胞變性和壞死程度顯著減輕。與對照組相比，模型組大鼠腦海馬BrdU、NeuN和GFAP陽性細胞數(shù)顯著下降（P＜0.01），乳果糖組和RS治療組較模型組有不同程度增加。
　　 本研究結(jié)果證實，地蘇合劑能夠在一定程度上提高HE大鼠自發(fā)運動次數(shù)和學(xué)習(xí)記憶能力;減輕CCl4誘導(dǎo)的肝損傷，治療肝硬化;解除腦內(nèi)氨毒性作用，抑制腦內(nèi)PBRs和NMDA受體結(jié)合位點的增加