胞外鈣選擇性增強(qiáng)阿霉素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞死亡.pdf

1、癌細(xì)胞和正常細(xì)胞對(duì)鈣離子存在各自不同的調(diào)節(jié)機(jī)制,這為鈣離子與癌癥藥物的聯(lián)用提供了一個(gè)新的可能。高濃度胞外鈣離子導(dǎo)致細(xì)胞死亡早有報(bào)道,但肝癌細(xì)胞和肝細(xì)胞對(duì)胞外鈣離子刺激應(yīng)答是否有差異還不清楚。本文發(fā)現(xiàn)用不同濃度胞外鈣離子處理兩種細(xì)胞后,HepG2細(xì)胞增殖抑制率、壞死率、凋亡率以及細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度均高于L02細(xì)胞。進(jìn)一步與阿霉素聯(lián)用的研究發(fā)現(xiàn),胞外鈣離子可選擇性增強(qiáng)阿霉素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)抑制,壞死和凋亡,但對(duì)L02細(xì)胞無(wú)顯著影響。同時(shí)

2、,胞外鈣離子顯著增強(qiáng)阿霉素誘導(dǎo)兩種細(xì)胞的胞內(nèi)鈣離子增加,但在增加后兩種細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子終濃度沒(méi)有差異。我們的結(jié)果提示肝癌細(xì)胞HepG2比正常肝細(xì)胞L02對(duì)胞外鈣離子更敏感,且胞外鈣離子能選擇性增強(qiáng)阿霉素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞死亡。由此推斷,鈣離子可能是一種理想的化療藥物增強(qiáng)劑。
　　第一部分:胞外鈣離子對(duì)HepG2細(xì)胞和L02細(xì)胞敏感性差異研究
　　目的:探討胞外鈣離子對(duì)HepG2細(xì)胞和L02細(xì)胞細(xì)胞活力、凋亡、壞死和胞內(nèi)鈣離子水

3、平影響的差異性,找出兩種細(xì)胞敏感性差異最大的鈣離子劑量。
　　方法:細(xì)胞用含不同濃度鈣離子和含10％新生牛血清的DMEM(Ca2+4.5mmol/L,Ca2+9mmol/L,Ca2+18mmol/L)處理,通過(guò)MTT試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力,流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry,FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率、壞死率和胞內(nèi)鈣離子濃度。
　　結(jié)果:對(duì)HepG2細(xì)胞,與對(duì)照組相比,鈣離子處理組的抑制率、凋亡率、壞死率均顯著升高(P<0.01)

4、。對(duì)于L02細(xì)胞,4.5mmol/L劑量組,細(xì)胞抑制率無(wú)明顯升高(P>0.05),其余鈣離子處理組細(xì)胞的抑制率、凋亡率、壞死率均顯著升高(P<0.01)。但各個(gè)鈣離子處理組,HepG2細(xì)胞的抑制率、凋亡率、壞死率都顯著高于L02細(xì)胞(P<0.05)。鈣離子處理后,兩種細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子水平均顯著增加(P<0.01),各處理組HepG2細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子水平顯著高于L02細(xì)胞(P<0.01),但在兩種細(xì)胞內(nèi),各處理組之間鈣離子終濃度沒(méi)有顯著差異(

5、P>0.05)。
　　結(jié)論:肝癌細(xì)胞HepG2和肝細(xì)胞L02對(duì)胞外鈣離子敏感性不同,HepG2細(xì)胞對(duì)胞外鈣離子更敏感。
　　第二部分:胞外鈣離子與阿霉素聯(lián)合對(duì)HepG2細(xì)胞和L02細(xì)胞死亡影響的研究
　　目的:探討鈣離子能否選擇性增強(qiáng)阿霉素對(duì)HepG2細(xì)胞的殺傷作用。
　　方法:細(xì)胞用單獨(dú)和聯(lián)合含鈣離子和藥物(含10%新生牛血清)的DMEM(Ca2+9mmol/L,ADM0.1μg/ml,Ca2+9mmol/L+

6、ADM0.1μg/ml)處理,通過(guò)MTT試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率、壞死率和胞內(nèi)鈣離子濃度。
　　結(jié)果:單獨(dú)阿霉素(0.1μg/ml)處理,L02細(xì)胞抑制率、凋亡率要明顯高于HepG2細(xì)胞(P<0.05),兩種細(xì)胞壞死率沒(méi)有差異(P>0.05)。鈣離子聯(lián)合阿霉素之后,胞外鈣離子顯著提高了阿霉素誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞抑制率、凋亡率和壞死率,阿霉素和鈣離子有顯著交互效應(yīng)(P<0.001),對(duì)于L02細(xì)胞,胞外鈣