Jagged1在胰腺癌細(xì)胞血管生成及增殖中的作用研究.pdf

1、目的：①觀察胰腺癌細(xì)胞中Notch 信號通路各分子表達(dá)情況及siRNA 抑制Jagged1 表達(dá)后Notch 信號通路活性的變化。②研究Jagged1 在胰腺癌細(xì)胞血管生成、遷移能力及體外細(xì)胞增殖中的作用，探討以Jagged1 為靶點(diǎn)的基因治療在胰腺癌治療作用及臨床應(yīng)用前景。
　　 方法：⑴實(shí)時熒光定量PCR 檢測胰腺癌細(xì)胞株SW1990 和PANC1 中Notch 信號通路受體Notch1、2、3、4，配體Jagged1、2和

2、下游靶基因Hes1 mRNA 的表達(dá)情況。⑵Jagged1 siRNA 轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞株SW1990 和PANC1，實(shí)時熒光定量PCR 和Western blot 檢測Jagged1、Notch1 及Hes1 mRNA 和蛋白水平的表達(dá)變化。⑶Jagged1 siRNA 轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞，收集細(xì)胞上清，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測VEGF、Ang2、bFGF、MMP9 蛋白濃度，實(shí)時熒光定量PCR 檢測VEGF mRNA 水平變化。

3、體外細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)觀察Jagged1 siRNA 對細(xì)胞遷移能力的影響。⑷采用CCK-8 試劑盒檢測Jagged1 siRNA 對胰腺癌細(xì)胞的增殖作用。
　　 結(jié)果：實(shí)時熒光定量PCR 和Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Jagged1在胰腺癌細(xì)胞株SW1990 和PANC1 中均高表達(dá)；15 nmol/L Jagged1siRNA 可顯著抑制Jagged1 的表達(dá)，蛋白水平的抑制率SW1990 細(xì)胞為（64.14±13.04

4、）％，PANC1 細(xì)胞為（61.20±10.63）％。Jagged1 siRNA也可抑制Notch 信號通路靶基因Hes1 的表達(dá)，蛋白水平的抑制率SW1990 細(xì)胞為（55.50±12.78）％，PANC1 細(xì)胞為（57.98±5.68）％。然而與對照組比較，si-JAG1 組Notch1 mRNA 和蛋白水平的表達(dá)均無顯著差異。ELISA 結(jié)果顯示，si-JAG1 組的VEGF 蛋白濃度明顯低于陰性對照組（SW1990 細(xì)胞867.

5、93±58.69 vs 1516.24±37.58，PANC1 細(xì)胞951.13±120.49 vs 1413.68±33.56，P < 0.05），但Ang2、bFGF、MMP9 蛋白濃度無顯著差異。同時實(shí)時熒光定量PCR 結(jié)果也顯示，SW1990 和PANC1 細(xì)胞si-JAG1 組的VEGF mRNA 表達(dá)水平與對照組比較均有顯著下降（分別為0.52±0.05 vs 1 和0.60±0.05 vs1，P 值均<0.05）。細(xì)胞遷移

6、實(shí)驗(yàn)顯示，si-JAG1 組的胰腺癌細(xì)胞遷移能力明顯減弱。與對照組相比SW1990 和PANC1 細(xì)胞每高倍鏡視野下的細(xì)胞數(shù)分別為（65.25±5.56）個vs（122.25±11.09）個和（57.50±8.58）個vs（112.00±12.52）個，均有顯著差異（P<0.05）。Jagged1siRNA 可抑制胰腺癌細(xì)胞的體外增殖，轉(zhuǎn)染72 h 對SW199 和PANC1細(xì)胞抑制率分別為（15.01±1.43）％ 和（18.56±0