苯并芘損傷胎盤絨毛組織機(jī)理及VE防護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:1觀察小鼠妊娠前和妊娠早期BaP暴露所造成胎盤絨毛組織形態(tài)學(xué)改變；
　　 2研究BaP造成胎盤絨毛組織細(xì)胞損傷的作用機(jī)制:
　　 3研究維生素E是否對(duì)BaP的暴露起保護(hù)性作用；
　　 4為今后的臨床研究和孕期保健提供一定的指導(dǎo)。
　　 方法:1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇:將150只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(ICR小鼠:雌鼠100只、雄鼠50只)隨機(jī)分為5組,每組30只(雌鼠20只、雄鼠10只),雌、雄鼠分開飼養(yǎng)。
　　

2、 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組對(duì)照組:雌鼠每天灌胃BaP(2mg/kg)；10mg/kg VE對(duì)抗組:雌鼠每天灌胃BaP(2mg/kg)+維生素E(10mg/kg):20mg/kg VE對(duì)抗組:雌鼠每天灌胃BaP(2mg/kg)+維生素E(20mg/kg):40mg/kg VE對(duì)抗組:雌鼠每天灌胃BaP(2mg/kg)+維生素E(40mg/kg):空白組:雌鼠每天灌胃相同體積的橄欖油。
　　 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處理
　　 將所有的雌鼠灌胃

3、15天后(三個(gè)動(dòng)情周期),將雌鼠與不作任何處理的雄鼠同籠(每籠2只雌鼠,1只雄鼠),第2天查看雌鼠陰道外口出現(xiàn)精液栓表示懷孕第1天,雌鼠與雄鼠分開,將已受孕的小鼠繼續(xù)上述處理7天(早期妊娠7天),最后一次灌胃后處死小鼠取出胎盤絨毛組織測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。
　　 4測(cè)定方法:
　　 4.1 RT-PCR法測(cè)定胎盤絨毛組織Bax與Bcl-2兩目的基因的mRNA水平的表達(dá)情況；
　　 4.2用GSH-PX與SOD酶活性檢測(cè)試

4、劑盒檢測(cè)胎盤絨毛組織的GStt-PX與SOD活性；
　　 4.3用HE染色法觀察胎盤絨毛組織細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變；
　　 4.4免疫組織化學(xué)法檢測(cè)胎盤絨毛組織Bax與Bcl-2兩目的基因的蛋白水平表達(dá)情況,并在顯微鏡下觀察其蛋白表達(dá)的具體位置。
　　 4.5使用SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 結(jié)果:1胎盤絨毛組織凋亡相關(guān)基因Bax與Bcl-2基因的mRNA水平的表達(dá)量:小鼠給予2mg/kg.d后,胎

5、盤絨毛組織Bax基因的mRNA水平表達(dá)量要顯著高于空白組(P<0.01)。給予不同濃度的維生素E(10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d)后其Bax基因mRNA水平表達(dá)量隨著維生素E劑量的加大而減少,但10mg/kg.d對(duì)抗組與20mg/kg.d對(duì)抗組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.183>0.05),且10mg/kg.d對(duì)抗組與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.197>0.05)。Bcl-2基因的mRNA水平表達(dá)量要顯著低于空

6、白組(P<0.01),給予不同濃度的維生素E(10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d)后其Bcl-2基因的mRNA水平表達(dá)量隨著維生素E劑量的加大而減少(P<0.05)。兩基因的mRNA水平表達(dá)量比值隨著維生素E劑量的加大而逐漸降低(P<0.01),顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。Bax與Bcl-2基因的mRNA水平表達(dá)量上存在一定的負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.951,P=0.002<0.01)。
　　 2胎盤絨毛

7、組織細(xì)胞GSH-PX與SOD活性的改變:小鼠給予2mg/kg.d后胎盤絨毛組織細(xì)胞的GSH-PX與SOD活性均降低,顯著低于空白組(P<0.01)。給予不同濃度的維生素E(10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d)后,GSH-PX與SOD的活性均較BaP(2mg/kg.d)組升高(P<0.05),隨著維生素E劑量的加大兩酶的活性均逐漸升高(P<0.05),但20mg/kg.d對(duì)抗組和40mg/kg.d對(duì)抗組GSH.PX

8、活性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.205>0.05)。
　　 3胎盤絨毛組織細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變:通過(guò)HE染色法在400倍鏡下觀察胎盤絨毛組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,發(fā)現(xiàn)小鼠給予2mg/kg.d后,胎盤絨毛組織細(xì)胞呈現(xiàn)細(xì)胞凋亡的典型特征:核膜皺縮,核固縮,核碎裂,且數(shù)量較空白組明顯增多,給予不同濃度的維生素E(10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d)后其凋亡細(xì)胞的數(shù)量減少,且隨著劑量的加大其數(shù)量逐漸減少。
　　 4胎盤絨

9、毛組織凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2基因的蛋白水平的表達(dá)量:小鼠給予2mg/kg.d后,胎盤絨毛組織Bax基因的蛋白水平表達(dá)量要顯著高于空白組(P<0.01)。Bcl-2基因的蛋白水平的表達(dá)量顯著低于空白組(P<0.01)。給予不同濃度的維生素E(10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d)后Bax基因的蛋白水平表達(dá)量逐漸減少(P<0.05)且隨著維生素E劑量的加大而表達(dá)量逐漸減少(P<0.05),而Bcl-2基因的蛋白

10、水平表達(dá)量逐漸升高(P<0.05)且隨著維生素E劑量的加大而表達(dá)量逐漸升高(P<0.05)。兩基因蛋白水平表達(dá)量比值隨著維生素劑量的加大而逐漸降低(P<0.01),顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。Bax與Bcl-2基因的蛋白水平表達(dá)量之間存在一定的相關(guān)關(guān)系(r=-0.825,P=0.021〈0.05)。Bax基因的蛋白水平表達(dá)量與mRNA水平表達(dá)量上存在一定的相關(guān)關(guān)系(r=0.789.P=0.025<0.05),Bcl-2基因的蛋白水平

11、表達(dá)量與其mRNA水平的表達(dá)量之間存在一定相關(guān)關(guān)系(r=0.972,P=0.018〈0.05)。
　　 結(jié)論:1已證實(shí)小鼠孕前(15天)和孕早期7天BaP(2mg/kg.d)的暴露能促進(jìn)胎盤絨毛組織細(xì)胞發(fā)生凋亡:
　　 2首次證實(shí)在胎盤絨毛組織中BaP能通過(guò)升高Bax基因mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)量,降低Bcl-2基因mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)量而促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生凋亡；
　　 3首次證實(shí)在胎盤絨毛組織中BaP通過(guò)