胰島素抑制小鼠胰腺β細胞VGLUT2基因表達.pdf

1、[目的]
　　 2型糖尿病(Type2 diabetes mellitus)是一種由多因素相互作用形成的常見的內(nèi)分泌代謝疾病，在糖尿病的發(fā)病過程中胰島素分泌起著非常重要的作用；以谷氨酸作為信使分子的胰島素分泌系統(tǒng)稱為谷氨酰胺能系統(tǒng)，這一系統(tǒng)是整個胰島素分泌機制中的重要組成部分，而由囊泡谷氨酸轉(zhuǎn)運子轉(zhuǎn)運谷氨酸進入胰島素分泌囊泡的過程是整個胰島素分泌過程中的限速步驟。本課題從胰島素對于小鼠VGLUT2(mVGLUT2)基因表達調(diào)控入

2、手，觀察這一調(diào)控機制在胰島素調(diào)節(jié)β細胞功能中的作用，探討這一作用對于胰島素分泌的影響及其在2型糖尿病發(fā)生中的意義。
　　 [方法]
　　 在體外培養(yǎng)小鼠β細胞系MIN6，觀察不同濃度的胰島素水平作用下，利用promega公司的Dual-Luciferase Reporter Assay System檢測mVGLUT2基因的啟動子活性，利用Real-time PCR技術(shù)檢測mVGLUT2基因mRNA表達水平，及利用west

3、en blot檢測mVGLUT2基因蛋白質(zhì)水平的變化，初步確定胰島素對mVGLUT2基因表達的調(diào)控作用及具體作用環(huán)節(jié)；最后利用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測不同濃度的胰島素水平作用時間下小鼠β細胞系MIN6細胞C-肽的分泌量，從而間接反映胰島素對MIN6細胞的分泌作用的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 胰島素抑制了mVGLUT2啟動子活性，mVGLUT2的mRNA表達水平及蛋白質(zhì)表達水平下降，小鼠β細胞系MIN6的C-肽分泌功能下降。

4、
　　 [結(jié)論]
　　 無糖條件下胰島素抑制了mVGLUT2啟動子活性表達，利用Real-time PCR技術(shù)檢測mVGLUT2基因mRNA表達水平，及利用westen blot檢測mVGLUT2基因蛋白質(zhì)水平的變化，得出胰島素反饋抑制mVGLUT2基因表達的最佳時間點。ELISA法檢測細胞的C-肽分泌情況，間接反映小鼠β細胞系MIN6細胞的分泌功能下降；提示胰島素對小鼠VGLUT2(mVGLUT2)基因調(diào)節(jié)有重要的抑制