核因子-κB圈套寡脫氧核苷酸聯(lián)合紫杉醇治療肺癌的探討.pdf

1、背景：肺癌是目前嚴(yán)重威害人類健康和生命的惡性腫瘤之一，根據(jù)流行病學(xué)相關(guān)研究結(jié)果，近年來，肺癌的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)，據(jù)統(tǒng)計(jì)，占所有惡性腫瘤發(fā)病率的12％。在歐美某些國(guó)家和我國(guó)大中城市，其發(fā)病率已居于首位，且發(fā)病年齡趨于年輕化，與吸煙、環(huán)境污染物密切相關(guān)，其治療難度大、迅速轉(zhuǎn)移、死亡率高為特點(diǎn)。腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移已成為當(dāng)今導(dǎo)致治療失敗和患者死亡的主要原因，因此尋找關(guān)鍵靶位點(diǎn)抑制肺癌血管生成，為肺癌的臨床治療開辟一條新的途徑。
　　

2、 核因子-κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)是一種多顯性基因轉(zhuǎn)錄因子，與多種基因的轉(zhuǎn)錄密切相關(guān)，在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，與多種細(xì)胞基因的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子發(fā)生特異性結(jié)合，與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growthfactor，VEGF)、環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)關(guān)系密切，參與炎癥反應(yīng)、損傷應(yīng)激、免疫防御、細(xì)胞增殖及凋亡等過程。核因子-κB圈套寡脫

3、氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)是目前研究發(fā)現(xiàn)進(jìn)行體內(nèi)外基因調(diào)控的強(qiáng)有力工具，含有轉(zhuǎn)錄因子識(shí)別序列的寡核苷酸或質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞，與核內(nèi)基因啟動(dòng)子區(qū)相應(yīng)順勢(shì)作用元件競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子，從而抑制啟動(dòng)子活化，達(dá)到抑制基因轉(zhuǎn)錄和翻譯的目的，其能明顯抑制癌細(xì)胞的增殖，并可提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物(紫杉醇)的敏感性。
　　 目的：研究NF-κB圈套寡脫氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)聯(lián)合紫杉醇對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡、血管生

4、成的影響及其作用機(jī)制，為臨床實(shí)踐提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、培養(yǎng)人肺癌細(xì)胞A549。
　　 2、脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法介導(dǎo)核因子-κB圈套寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)和核因子-κB錯(cuò)義圈套寡核苷酸(NF-κB scramble decoy ODN)處理A549細(xì)胞。
　　 3、MTT試驗(yàn)觀察干預(yù)96 h經(jīng)NF-κB decoy ODN及NF-κB Scramble decoyODN作用

5、后肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
　　 4、設(shè)對(duì)照組、NF-κB decoy ODN組、紫杉醇組(1000 ng/mL)和NF-κB decoyODN+紫杉醇組，RT-PCR法測(cè)環(huán)氧合酶-2(COX-2)mRNA水平表達(dá)，免疫組織化學(xué)法測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)蛋白表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組48 h后細(xì)胞凋亡率。
　　 結(jié)果：
　　 1、核因子-κB圈套寡脫氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)使細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受

6、到抑制，時(shí)間越長(zhǎng)抑制作用越明顯。
　　 2、核因子-κB圈套寡脫氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)、紫杉醇干預(yù)后A549細(xì)胞的環(huán)氧合酶-2(COX-2)mRNA水平表達(dá)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)蛋白表達(dá)均下降，COX-2 mRNA水平表達(dá)各組濃度分別是：0.71±1.4μg/μL、0.44±1.8μg/μL、0.51±7.2μg/μL、0.34±9.5μg/μL(F=7.8，P<0.05)，VEGF蛋白表達(dá)各組細(xì)胞陽

7、性率分別是：85±0.50％，63±0.26％，57±1.5％，21±0.34％(F=21，P<0.05)。
　　 3、核因子-κB圈套寡脫氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)聯(lián)合紫杉醇可促使A549細(xì)胞凋亡增加，二者聯(lián)用呈協(xié)同或相加作用，各組細(xì)胞的總凋亡率分別是：(16.8±0.01)％、(5.6±0.02)％、(32.6±0.04)％，均高于對(duì)照組(6.0±0.02)％(F=14，P<0.05)。
　　 結(jié)論：

8、
　　 1.核因子-κB圈套寡脫氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)能明顯抑制肺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)。
　　 2.核因子-κB圈套寡脫氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)聯(lián)合紫杉醇可明顯抑制肺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)，該作用可能與環(huán)氧合酶-2(COX-2)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)相關(guān)。
　　 3.核因子-κB圈套寡脫氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)聯(lián)合紫杉醇可增強(qiáng)對(duì)肺癌A549細(xì)胞增