G蛋白βγ復(fù)合體調(diào)控TNF誘導(dǎo)的細(xì)胞壞死機(jī)制的研究.pdf

1、早期的研究認(rèn)為細(xì)胞壞死是不受信號通路調(diào)控的。然而近幾年的研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞壞死和細(xì)胞凋亡一樣同樣存在著信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)。由受體相互作用蛋白1（RIP1）和受體相互作用蛋白3（RIP3）等蛋白組成的壞死復(fù)合體在細(xì)胞壞死信號中扮演著決定性角色。盡管最近的研究發(fā)現(xiàn)了一些影響壞死信號的蛋白，但壞死復(fù)合體如何形成及其如何影響下游底物并導(dǎo)致最終細(xì)胞壞死的機(jī)制依然不清楚。
　　 本文通過逆轉(zhuǎn)錄病毒隨機(jī)插入染色體破壞基因的方法在鼠成纖維細(xì)胞系L929中

2、篩選對腫瘤壞死因子(TNF)抗性的突變株。通過鑒定發(fā)現(xiàn)其中一株突變株是由于逆轉(zhuǎn)錄病毒插入到鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白γ亞基10(GNG10)的第一個(gè)外顯子和第二個(gè)外顯子中間，影響了該基因的正常轉(zhuǎn)錄，從而導(dǎo)致了對TNF抗性的產(chǎn)生。敲低GNG10同樣可以抑制TNF誘導(dǎo)的細(xì)胞壞死。根據(jù)以往的研究，GNG家族成員往往是與鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白β亞基(GNB)家族成員形成異源二聚體來介導(dǎo)下游信號通路，因此我們檢測了GNB家族成員是否參與TNF抗性的產(chǎn)生。

3、我們發(fā)現(xiàn)敲低GNB2同樣產(chǎn)生了對TNF的抗性，這暗示著Gβ2γ10復(fù)合體參與到了TNF信號通路。廣譜性的Gβγ復(fù)合物抑制劑同樣可以抑制TNF誘導(dǎo)的細(xì)胞壞死。
　　 通過尋找Gβ2γ10復(fù)合體下游的信號通路，我們發(fā)現(xiàn)敲低GNG10可以影響src激酶第418位的磷酸化。進(jìn)一步的研究表明敲低src激酶或者使用src激酶的抑制劑可以抑制TNF誘導(dǎo)的細(xì)胞壞死。而當(dāng)敲低src激酶的上游抑制激酶CSK，src激酶的活性上升，使細(xì)胞對TNF誘導(dǎo)