甜高粱ACE抑制肽的制備及其特性研究.pdf

1、食源ACE抑制肽因具有降血壓效果明顯、低毒副作用等優(yōu)點,目前已成為降血壓藥物研究的熱點之一。本文利用酶法制備甜高粱ACE抑制肽,以酶解產(chǎn)物對ACE的抑制率為評價指標,篩選出適宜的水解蛋白酶;通過Plackett-Burman試驗、最陡爬坡試驗、Box-Behnken中心組合試驗優(yōu)化甜高粱蛋白水解工藝;研究甜高粱蛋白酶解的可控動力學模型;通過超濾、離子交換樹脂、凝膠層析分離純化甜高粱ACE抑制肽,并對其結(jié)構(gòu)進行表征。
　　試驗結(jié)果表

2、明,甜高粱中粗蛋白含量為13.27％,其中,疏水性氨基酸含量為37.92%,表明甜高粱蛋白是制備ACE抑制肽的理想蛋白原料。差示掃描量熱分析表明,甜高粱蛋白的熱變性溫度為62.78℃。
　　從Alcalase、α-胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶四種蛋白酶中篩選出Alcalase作為制備甜高粱ACE抑制肽的水解用酶,通過Plackett-Burman試驗得出影響酶解產(chǎn)物ACE抑制活性的重要因素為溫度、pH和加酶量。經(jīng)最陡爬坡試驗

3、、Box-Behnken中心組合試驗確定最優(yōu)工藝條件為:pH8.0、酶解溫度56℃、加酶量5200U/g。
　　通過Alcalase可控酶解甜高粱蛋白,得到水解速率R關(guān)于初始底物濃度S0,初始酶濃度E0和水解度DH的動力學模型為:R=(50.103E0-0.4234)exp[-0.206(DH)];水解度DH關(guān)于初始底物濃度S0,初始酶濃度E0和水解時間t的動力學模型為:DH=4.854ln[1+(10.321E0/S0-0.08

4、7)t]。利用本模型制備的甜高粱ACE抑制肽具有良好的酸、堿、熱穩(wěn)定性和耐腸道酶消化能力。
　　甜高粱蛋白酶解產(chǎn)物經(jīng)超濾分離后,各組分的體外ACE抑制活性從高到低依次為:<1kDa組分(IC50=0.116mg/mL)、1～5kDa組分(IC50=0.305mg/mL)、5~10kDa組分(IC50=1.012mg/mL)和>10kDa組分(IC50=1.225mg/mL)。Lineweaver-Burk曲線揭示出<1kDa組分和