3號(hào)染色體短臂抑癌基因CpG島甲基化表型(CIMP)及hOGGl基因變異與非小細(xì)胞肺癌關(guān)系的研究.pdf

1、目的：研究3號(hào)染色體短臂(3p)相關(guān)抑癌基因CpG島甲基化表型(CIMP)，及hOGG1基因變異與非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患病關(guān)系，以作為早期診斷非小細(xì)胞肺癌和評(píng)估預(yù)后生存情況的生物學(xué)指標(biāo)。
　　 方法：1：對(duì)4株NSCLC細(xì)胞株(SPC—A—1，A549，95—D和LTEP—α—2)進(jìn)行培養(yǎng)；細(xì)胞去甲基化效應(yīng)由5—雜氮—2’—脫氧胞苷酸(5—aza—CdR)處理；MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖；對(duì)80例NSCLC患者和無(wú)腫瘤歷史的正常

2、對(duì)照外周血(PBMC)樣本進(jìn)行3號(hào)染色體短臂抑癌基因CpG島甲基化表型(3pCIMP)分析，3pCIMP指的是每份樣本中有3個(gè)或多于3個(gè)3號(hào)染色體相關(guān)抑癌基因同時(shí)甲基化，甲基化特異性PCR(MSP)檢測(cè)6個(gè)基因的甲基化狀態(tài)，2：Haploview software V4．1軟件分析選取hOGG1基因htSNP，RFLP和SSCP法對(duì)117例非小細(xì)胞肺癌外周血樣本和121例無(wú)腫瘤歷史正常對(duì)照外周血樣本進(jìn)行基因分型，然后進(jìn)行單倍型分析；對(duì)5

3、株NSCLC細(xì)胞株(SPC—A—1，A549，95—D，NCI—H460和LTEP—α—2)進(jìn)行培養(yǎng)，5—雜氮—2’—脫氧胞苷酸(5—aza—CdR)去甲基化處理并收集DNA和RNA，117對(duì)NSCLC患者腫瘤組織樣本和匹配的非腫瘤組織樣本進(jìn)行hOGG1基因甲基化分析，以上結(jié)果最終通過(guò)Logistic回歸分析對(duì)性別、年齡、吸煙史進(jìn)行校正。
　　 結(jié)果：去甲基化實(shí)驗(yàn)顯示3pCIMP狀態(tài)在NSCLC細(xì)胞增殖中起到了重要作用，NSCL

4、C患者外周血樣本中有97．5％樣本3號(hào)染色體短臂(3p)上6個(gè)基因中(hOGG1，RAR—B，SEMA3B，RASSF1A，BLU，F(xiàn)HIT)任一基因的甲基化。讓人感興趣的是，NSCLC的PBMC樣本中3pCIMP+為43．8％但是在正常對(duì)照的PBMC樣本中僅有6．3％。以上數(shù)據(jù)顯示3pCIMP狀態(tài)在NSCLC和正常對(duì)照中有顯著差異(P<0．001)。更重要的是，結(jié)果進(jìn)一步表明在中國(guó)人群中，3pCIMP陽(yáng)性攜帶者非小細(xì)肺癌患病風(fēng)險(xiǎn)增加了

5、12．8倍(校正后OR，12．8；95％CI，4．38—37．4，P<0．001)。
　　 117例NSCLC外周血樣本和121例正常對(duì)照外周血樣本中hOGG1基因多態(tài)性分析無(wú)顯著差異，但讓人感興趣的是，5株非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株經(jīng)去甲基化藥物處理前后，hOGG1基因甲基化狀態(tài)發(fā)生了變化，其中3株細(xì)胞在去甲基化藥物處理前后mRNA表達(dá)有顯著差異；進(jìn)一步對(duì)117例NSCLC和配對(duì)的非腫瘤組織樣本中hOGG1基因甲基化狀態(tài)檢測(cè)顯示，NS