亞急性1,2-DCE染毒對星形膠質(zhì)細(xì)胞活化及NO代謝影響的研究.pdf

1、前言:
　　 1.2-二氯乙烷(Dichloroethane,1,2-DCE)是工業(yè)上常用的有機(jī)溶劑之一,主要用于粘合劑的稀釋劑和氯代烴的生產(chǎn)等。易經(jīng)呼吸道、消化道和皮膚吸收并快速分布到全身,特別是脂肪豐富的組織器官。中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)是1,2-DCE中毒損傷的重要靶器官之一。中毒、創(chuàng)傷和感染等引起的CNS損傷的一個特征性變化是星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocytes,AS)活化,產(chǎn)生

2、大量的一氧化氮(nitricoxide,NO)、腫瘤壞死岡子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)等細(xì)胞因子。其過量生成或積聚可導(dǎo)致血腦屏障功能障礙、神經(jīng)細(xì)胞死亡及炎癥反應(yīng)。星形膠質(zhì)細(xì)胞活化后分泌的活性物質(zhì)可引起誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)表達(dá),并催化產(chǎn)生大量的NO,引起神經(jīng)毒性作用。
　　 本研究以昆明種小鼠為實(shí)驗(yàn)對象,通過探討亞急性1,2-DCE中毒對小鼠腦AS活化及NO代謝的影響,

3、為揭示亞急性1,2-DCE中毒的神經(jīng)毒作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)參考數(shù)據(jù)。
　　 方法:
　　 選用雌性昆明種小鼠40只,隨機(jī)分為對照組及低、中、高染毒劑量組,劑量分別是0.4、0.7、1.0g/m3。以1,2-DCE為受試物。采用靜式吸入方式染毒,將小鼠置于體積為100L染毒柜中,一次放入10只小鼠,每天染毒3.5h,對照組小鼠除不加1,2-DCE外,其余處理過程同染毒組小鼠。染毒過程中每日觀察小鼠行為與體重的變化。每日染毒前進(jìn)

4、行曠場試驗(yàn),連續(xù)染毒6天結(jié)束后,處死小鼠取腦組織并稱重。采用HE染色法觀察腦組織病理形態(tài)。采用免疫熒光染色法和Western-blot法測定腦組織GFAP和S-100β蛋白表達(dá)。采用化學(xué)比色法測定NO含量及iNOS活性。采用免疫組織化學(xué)法和Western-blot法測定腦組織iNOS蛋白表達(dá)。采用Real-timepcr法測定iNOSmRNA含量。
　　 結(jié)果:
　　 1、亞急性1,2-DCE染毒小鼠一般行為表現(xiàn)

5、　　 高劑量染毒組部分小鼠在染毒后出現(xiàn)軀體震顫,被抓尾提起時(shí),呈雙前肢交叉、雙后肢緊抱狀態(tài)。在染毒的第3天和第5天,高劑量染毒組各有一只小鼠死亡。對照組及其它染毒組小鼠未出現(xiàn)明顯異常改變。
　　 2、亞急性1,2-DCE染毒對小鼠曠場行為的影響
　　 染毒4天后,各染毒組小鼠穿越格子數(shù)隨染毒劑量的增加呈下降趨勢,5、6天后中、高劑量組與對照組相比穿越格子數(shù)顯著下降。染毒5、6天后高劑量組小鼠中央格停留時(shí)間與對照組相比顯

6、著增加。染毒4天后小鼠總行走距離隨染毒劑量的增加呈下降趨勢,高劑量組與對照組相比顯著下降。
　　 3、亞急性1,2-DCE染毒對星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響
　　 中、高劑量染毒組的腦組織中GFAP和S-100β陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)逐漸增多,與對照組相比差異顯著,且胞體變大及突起增粗、加長。各染毒組小鼠腦組織中GFAP蛋白表達(dá)隨染毒劑量的增加而逐漸增加,中、高劑量組顯著高于對照組。S-100β蛋白表達(dá)隨染毒劑量的增加呈先降低后增加的

7、趨勢,中、高劑量組對照組相比差異顯著。
　　 4、亞急性1,2-DCE染毒對NO和iNOS的影響
　　 低、中劑量小鼠腦組織中NO含量及iNOS活性與對照組相比均無顯著差異。高劑量組NO含量及iNOS活性顯著高于對照組。中、高劑量染毒組小鼠腦組織中iNOS蛋白表達(dá)與對照組相比顯著增加。各組小鼠腦組織中iNOSmRNA水平隨染毒劑量的增加呈增加趨勢,但與對照組相比無顯著差異。
　　 結(jié)論:
　　 1、中、高