基質(zhì)金屬蛋白酶3高表達(dá)在腦動(dòng)靜脈畸形發(fā)生發(fā)展過程中作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　研究基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMP-3）在人腦動(dòng)靜脈畸形(BAVM)組織中的表達(dá)情況，通過體外實(shí)驗(yàn)探討MMP-3對(duì)人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HBMEC)的增殖、遷移、侵襲及血管成形能力的影響，最后通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究MMP-3表達(dá)量對(duì)腦血管結(jié)構(gòu)造成的影響，從而探討MMP-3在BAVM發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用機(jī)制。
　　方法：
　　MMPs的一些成員在BAVM組織中有異常改變，并與BAVM的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。MMP-3是

2、MMPs家族中的重要成員，在介導(dǎo)和調(diào)節(jié)其他MMPs生成及作用發(fā)揮方面具有十分重要的作用。本課題首先通過免疫組織化學(xué)及Western-blot的方法檢測(cè)MMP-3在人BAVM組織中的表達(dá)情況。在此基礎(chǔ)上通過體外實(shí)驗(yàn)，即構(gòu)建MMP-3高表達(dá)和干擾質(zhì)粒，通過質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的方法篩選出MMP-3穩(wěn)定表達(dá)的HBMEC株，再通過CCK8實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)高表達(dá)和干擾MMP-3基因?qū)BMEC增殖、遷移和侵襲能力的影響。之后通過體

3、外構(gòu)建matrigel三維血管形成模型，觀察高表達(dá)和干擾MMP-3基因?qū)BMEC血管形成能力的影響。最后，通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，即首先建立腦內(nèi)靜脈高壓大鼠模型，在此基礎(chǔ)上通過立體定向微量注射轉(zhuǎn)染了MMP-3基因慢病毒載體的HBMEC的方法，人為造成大鼠腦內(nèi)局部MMP-3表達(dá)量的變化，最終通過血管內(nèi)注射熒光染料和免疫組化的方法研究MMP-3表達(dá)量對(duì)大鼠腦血管結(jié)構(gòu)造成的影響。
　　結(jié)果：
　　免疫組織化學(xué)及Western-blot的檢

4、測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在人BAVM組織中，MMP-3高表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞及基底膜，而正常對(duì)照組無明顯表達(dá)。RT-PCR技術(shù)進(jìn)一步證實(shí)，在人BAVM組織中，MMP-3基因表達(dá)量明顯增加。在體外實(shí)驗(yàn)部分，通過質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的方法成功構(gòu)建了MMP-3高表達(dá)和干擾質(zhì)粒，并篩選出了穩(wěn)定表達(dá)的HBMEC細(xì)胞株。CCK8實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明MMP-3高表達(dá)可增強(qiáng)HBMEC的增殖、遷移和侵襲能力，而matrigel三維血管成形實(shí)驗(yàn)說明MM

5、P-3基因?qū)BMEC的血管形成能力有重要影響。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分，通過立體定向微量注射轉(zhuǎn)染了MMP-3基因慢病毒載體的HBMEC的方法，成功建立了腦靜脈高壓-矢狀竇旁腦組織局部MMP-3高表達(dá)大鼠模型。對(duì)該模型進(jìn)行的腦血管免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，MMP-3高表達(dá)可以引起腦靜脈高壓-矢狀竇旁腦組織局部MMP-3高表達(dá)模型大鼠的腦血管通透性的增加，即腦血管結(jié)構(gòu)和功能的改變。與此同時(shí)，MMP-3高表達(dá)可以引起腦靜脈高壓大鼠腦微血管周圍的星形膠質(zhì)細(xì)胞特