不同產(chǎn)地葎草的品質(zhì)對比研究.pdf

1、葎草為?？浦参锶劜軭umulus scandens（Lour.）Merr.的干燥地上部分，具有清熱解毒，利尿通淋的功效，主治肺熱咳嗽、肺癰、肺結(jié)核、虛熱煩渴、熱淋、水腫、小便不利、濕熱瀉痢、熱毒瘡瘍、皮膚瘙癢等。
　　本文在前期葎草的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及抗結(jié)核有效部位研究的基礎(chǔ)上，對不同產(chǎn)地葎草進(jìn)行了品質(zhì)對比研究，并對不同生長期的葎草進(jìn)行了有效成分動態(tài)變化研究，為完善和提高葎草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及適宜采收期的選擇提供了參考依據(jù)。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下

2、：
　　1.首次進(jìn)行了葎草不同生長時期干物質(zhì)積累及有效成分的動態(tài)變化研究，并運用主成分分析法，對有效成分的動態(tài)變化進(jìn)行了綜合分析，為葎草適宜采收期的確定提供了參考依據(jù)。
　　對兩個不同產(chǎn)地、一個生長周期不同采收時間葎草的干物質(zhì)積累及浸出物、總黃酮、木犀草素和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量進(jìn)行動態(tài)測定，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地干物質(zhì)積累及浸出物、總黃酮、木犀草素和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量差異大，同一產(chǎn)地不同采收

3、時間浸出物、總黃酮、木犀草素和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量有明顯的區(qū)別，采用主成分分析法對有效成分的動態(tài)變化進(jìn)行多指標(biāo)綜合分析，發(fā)現(xiàn)四川成都地區(qū)葎草主成分因子得分較高為2月，河北唐山地區(qū)葎草樣品主成分因子得分較高者為8月，說明不同產(chǎn)地有效成分積累動態(tài)有差異，可能與這兩個地區(qū)分屬于南方、北方，地理位置、環(huán)境、氣候等自然條件相差較大有關(guān)，提示其采收期的確定應(yīng)考慮產(chǎn)地因素。
　　2.首次對不同產(chǎn)地葎草進(jìn)行了藥材性狀的對比研究，

4、找出了其外觀性狀上的異同。
　　通過對不同產(chǎn)地葎草外觀性狀的仔細(xì)觀察，發(fā)現(xiàn)其性狀特征有所不同，主要體現(xiàn)在顏色、葉表面的剛毛及腺點等方面：多數(shù)樣品纏結(jié)成團(tuán)，少數(shù)樣品已切成段；顏色多為黃綠色，少為棕黃色或棕綠色；葉表面差別較明顯，主要是上、下表面剛毛、腺點的密度有差異；帶果實的樣品，其果實的顏色及表面的斑紋有差異。
　　3對不同產(chǎn)地葎草進(jìn)行了木犀草素、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的薄層色譜鑒別研究。
　　3.1按照20

5、10年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的木犀草素薄層鑒別方法，對32批樣品進(jìn)行了木犀草素的薄層鑒別。結(jié)果顯示，其中3號（浙江仙居）、4號(廣東韶關(guān))、7號（甘肅宕昌）、8號（江蘇連云港）、11號（湖南長沙）、16號（四川宜賓）、21號（山東青島）、23號（河北唐山）、24號（江西南昌）、25號（江西吉安）、28號（北京豐臺區(qū)）、29號（重慶南川）、30號（上海崇明島）、31號（安徽亳州藥材市場）和32號（廣西玉林藥材市場）15個樣品，在與木

6、犀草素對照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃綠色熒光斑點，但斑點的大小和熒光的強弱有所不同，其它樣品未檢出木犀草素，提示不同產(chǎn)地葎草在該成分的有無及量上有差異。
　　3.2通過對樣品前處理、展開系統(tǒng)、點樣量、展距、展開濕度、展開溫度及薄層板飽和時間等的考察，首次建立了芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的薄層鑒別方法。以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（8:6:3:1）為展開系統(tǒng)，分離效果較好，斑點多而清晰，Rf值適中。通過對32批不同產(chǎn)地及商

7、品葎草進(jìn)行薄層色譜實驗，表明該方法對葎草芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的鑒別效果較好。32批供試品色譜中，1號（遼寧撫順）、3號（浙江仙居）、4號（廣東韶關(guān)）、5號（陜西咸陽）、7號（甘肅宕昌）、8號（江蘇連云港）、11號（湖南長沙）、16號（四川宜賓）、20號（山東濟南）、21號（山東青島）、23號（河北唐山）、24號（江西南昌）、25號（江西吉安）、26號（福建福州）、28號（北京豐臺區(qū)）、29號（重慶南川）和30號（上海崇明島）

8、17批樣品，在與芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷對照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃綠色熒光斑點，但斑點的大小和熒光的強弱有所不同，其它樣品未檢出芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，提示不同產(chǎn)地葎草在該成分的有無及量上有差異。
　　4首次進(jìn)行了葎草HPLC指紋圖譜研究，建立了葎草的HPLC指紋圖譜分析方法，并對不同產(chǎn)地葎草進(jìn)行了聚類分析，為弄清不同產(chǎn)地葎草化學(xué)成分的差異性提供了參考依據(jù)。
　　4.1通過對色譜條件的篩選、梯度洗脫

9、方式的考察、供試品溶液制備的考察以及精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性的方法學(xué)驗證，建立了葎草乙酸乙酯部位的指紋圖譜。通過對32批葎草樣品HPLC指紋圖譜的分析，確定了15個共有峰。
　　4.2對葎草乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜進(jìn)行相似度分析，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地葎草藥材指紋圖譜相似度較低。進(jìn)行聚類分析，結(jié)果表明，以距離15劃分，可聚為兩類，相似度在0.7以上的樣品，包括5號（陜西咸陽）、6號（山西運城）、7號（甘肅宕昌）、9號（貴州安順）、1

10、0號（貴州貴陽）、13號（成都溫江區(qū)）、14號（成都錦江區(qū)）、15號（四川西昌）、18號（四川彭州）、19號（四川遂寧），可聚為一類，其余樣品聚為一類；以距離10劃分，可聚為3類，相似度在0.7以上的樣品，聚為一類，0.3~0.7之間的樣品，包括2號（河南南陽）、4號（廣東韶關(guān)）、11號（湖南長沙）、12號（廣西河池）、16號（四川宜賓）、17號（四川綿陽）、3號（浙江仙居）、24號（江西南昌）、25號（江西吉安）、26號（福建福州）、

11、27號（福建漳州）、32號（廣西玉林藥材市場），可聚為一類，其余樣品聚為一類。
　　5對32批不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行了水分、總灰分及酸不溶性灰分的檢查和浸出物的測定。
　　5.1按照2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的方法，對32批不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行水分測定。所測32批不同產(chǎn)地的葎草樣品水分含量最高為9.7％，最低為4.9%。參照2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中水分不得過10.0%的規(guī)定，32批樣品均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

12、r>　　5.2按照2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的方法，對32批不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行總灰分及酸不溶性灰分的測定。所測32批樣品總灰分最高為
　　19.83%，最低為10.43%；酸不溶性灰分最高為4.56%，最低為0.30%。參照2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，總灰分不得過19.0%，酸不溶性灰分不得過5.0%的規(guī)定，除24號（江西南昌）樣品總灰分不符合標(biāo)準(zhǔn)外，其余均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
　　5.3按照2010年版《四川

13、省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的方法，對32批不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行浸出物的測定。結(jié)果表明，32批不同產(chǎn)地葎草樣品的浸出物含量最高為21.88%，最低為8.73%。參照2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中葎草浸出物含量不得少于12.0%的規(guī)定，22號（重慶沙坪壩）、30號（上海崇明島）、31號（安徽亳州藥材市場）、32號（廣西玉林藥材市場）樣品不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。6首次建立了葎草總黃酮的紫外分光光度法測定方法、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的HPLC含

14、量測定方法，并對32批不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行了總黃酮、木犀草素及芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定，為完善葎草質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)及對比分析不同產(chǎn)地葎草質(zhì)量差異提供參考依據(jù)。
　　6.1對葎草進(jìn)行了紫外-分光光度法測定總黃酮含量的實驗研究。通過對供試品溶液制備、精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、加樣回收等的方法學(xué)考察，建立了以木犀草素為對照品的葎草總黃酮的紫外-分光光度法測定方法。運用該方法對不同產(chǎn)地樣品進(jìn)行總黃酮含量的測定，結(jié)果表明，不同產(chǎn)

15、地葎草樣品的總黃酮含量差異較大，3號（浙江仙居）、4號（廣東韶關(guān)）、5號（陜西咸陽）、12號（廣西河池）、16號（四川宜賓）、19號（四川遂寧）、26號（福建福州）和28號（北京豐臺區(qū)）8個樣品含量較高，22號（重慶沙坪壩）、24號（江西南昌）、30號（上海崇明島）、31號（安徽亳州藥材市場）、32號（廣西玉林藥材市場）5個樣品含量相對較低。
　　6.2按照前期建立的木犀草素HPLC含量測定方法，對不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行了木犀草素的

16、含量測定。結(jié)果表明，4號（廣東韶關(guān)）、8號（江蘇連云港）、16號（四川宜賓）、23號（河北唐山）、28號（北京豐臺區(qū)）5個樣品中木犀草素含量較高；2號（河南南陽）、6號（山西運城）、10號（貴州貴陽）、12號（廣西河池）、13號（成都溫江區(qū)）、14號（成都錦江區(qū)）、15號（四川西昌）、18號（四川彭州）、22號（重慶沙坪壩）和27號（福建漳州）10個樣品中未測出木犀草素含量。此結(jié)果與薄層色譜鑒別結(jié)果基本一致。
　　6.3對葎草進(jìn)行

17、了HPLC芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷含量測定的實驗研究。通過進(jìn)行測定波長及色譜條件的選擇、供試品溶液的制備方法的考察，以及精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、加樣回收試驗的方法學(xué)驗證，建立了葎草芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的HPLC測定方法。運用該方法對不同產(chǎn)地樣品進(jìn)行芹菜素-7- O-β-D-葡萄糖苷含量的測定，結(jié)果表明，1號（遼寧撫順）、3號（浙江仙居）、8號（江蘇連云港）、11號（湖南長沙）、16號（四川宜賓）、21號（山東濟南）、