山荊子多酚分離鑒定及對(duì)γ輻射誘導(dǎo)氧化損傷的防護(hù)作用.pdf

1、電離輻射能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，破壞機(jī)體的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，造成機(jī)體的抗氧化防御系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及胃腸功能等的嚴(yán)重?fù)p傷，甚至導(dǎo)致遺傳突變及引發(fā)癌癥。因此，尋找能夠降低氧化損傷、提升免疫活性，且高效無(wú)毒的天然輻射防護(hù)物質(zhì)成為研究熱點(diǎn)。本論文以山荊子多酚（Polyphenols from Malus baccata(Linn.) Borkh.，MBP）作為研究對(duì)象，采用不同溶劑進(jìn)行分離并獲得抗氧化活性最優(yōu)組分丙酮提取物MBP-3，對(duì)其分離及純

2、化工藝進(jìn)行研究，并對(duì)活性最強(qiáng)的梯度40％乙醇洗脫物MBP-3b進(jìn)行組成分析及結(jié)構(gòu)鑒定；系統(tǒng)的研究了MBP-3b對(duì)輻射誘導(dǎo)機(jī)體氧化損傷的防護(hù)作用途徑及作用機(jī)制。
　　采用四種不同極性的溶劑（水、乙醇、丙酮和乙酸乙酯）分別提取獲得山荊子多酚MBP-1~4四個(gè)組分，對(duì)多酚類(lèi)化合物含量進(jìn)行分析，并在體外建立不同抗氧化體系，研究 MBP的體外抗氧化活性和脂質(zhì)過(guò)氧化抑制活性。結(jié)果表明山荊子丙酮提取物MBP-3的總酚、黃酮和花色苷含量最高；四種

3、MBP均能不同程度的清除非生理性和生理性自由基，并具有顯著的總還原能力及脂質(zhì)過(guò)氧化抑制能力，其中MBP-3的抗氧化活性最為顯著，說(shuō)明MBP-3具有更有效的供電子及供氫能力，能夠終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、降低氧化應(yīng)激從而抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的發(fā)生。
　　采用超聲輔助提取方法分離山荊子多酚，通過(guò)響應(yīng)面法優(yōu)化得到山荊子多酚最佳提取工藝為：丙酮作為提取溶液，液料比13：1，提取溫度47℃和超聲功率330W，在最優(yōu)條件下所得山荊子多酚含量為1170.4

4、5±28.15 mg GAE/100g；大孔樹(shù)脂NKA-9層析純化MBP-3最優(yōu)條件為上樣體積1/5 BV，上樣流速1.5 BV/h，洗脫流速2.0 BV/h，動(dòng)態(tài)梯度洗脫下40%（v/v）乙醇洗脫物MBP-3b總酚含量最高，且抗氧化活性最強(qiáng)。
　　采用UPLC-Q-TOF-MS，結(jié)合UV-Vis及FT-IR光譜對(duì)MBP-3b進(jìn)行組成分析和結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MBP-3b主要由十種多酚化合物組成，分別為飛燕草素3,5-二葡萄糖苷、矢

5、車(chē)菊-3-葡萄糖苷、綠原酸、原花青素 C1、槲皮素-3-半乳糖苷、槲皮素-3-葡萄糖苷、槲皮素-3-木糖苷/阿拉伯糖苷、根皮素-2-木糖葡萄糖苷、槲皮素-3-鼠李糖苷和根皮苷，相對(duì)質(zhì)量百分含量分別為3.60%、9.29%、11.96%、1.64%、18.74%、6.63%、4.75%、7.16%、4.32%和18.24%。
　　在體外建立60Coγ輻射誘導(dǎo)脾細(xì)胞和外周血白細(xì)胞氧化損傷模型，通過(guò)對(duì)輻射后脾細(xì)胞的存活率、脾細(xì)胞內(nèi)氧化還

6、原狀態(tài)、外周血白細(xì)胞形態(tài)、脾細(xì)胞DNA的損傷以及脾細(xì)胞內(nèi)ROS的含量進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MBP-3b能夠顯著的降低輻射后外周血中異形白細(xì)胞的數(shù)量，并能通過(guò)促進(jìn)脾細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶SOD、CAT的活性，降低細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生，從而有效的抑制胞內(nèi)ROS的生成，降低細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)的進(jìn)程而抑制了DNA的損傷，提高了輻射條件下脾細(xì)胞存活率。
　　建立60Coγ輻射誘導(dǎo)小鼠氧化損傷模型，通過(guò)分析輻射后小鼠DNA損傷、免疫功能、抗氧

7、化防御系統(tǒng)活性來(lái)研究MBP-3b對(duì)小鼠的輻射防護(hù)作用途徑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MBP-3b能夠通過(guò)提高機(jī)體免疫功能，促進(jìn)機(jī)體酶促（SOD、CAT、GSH-Px及GST）及非酶促（T-AOC、GSH）抗氧化防御系統(tǒng)功能，降低輻射后機(jī)體的脂質(zhì)過(guò)氧化發(fā)生，從而有效抑制輻射后小鼠骨髓微核及染色體畸變的發(fā)生，對(duì)輻射誘導(dǎo)的小鼠機(jī)體氧化損傷具有防護(hù)作用。
　　通過(guò)對(duì)輻射條件下小鼠小腸及脾臟形態(tài)學(xué)及細(xì)胞凋亡進(jìn)行研究，結(jié)果表明， MBP-3b能夠緩解電離輻射

8、誘導(dǎo)的小鼠小腸及脾臟組織病變，抑制免疫細(xì)胞的大量凋亡；通過(guò)免疫組化方法對(duì)小鼠脾細(xì)胞線粒體凋亡信號(hào)途徑相關(guān)蛋白表達(dá)進(jìn)行研究，結(jié)果表明MBP-3b能夠有效抑制促凋亡Bax蛋白表達(dá)，促進(jìn)抗凋亡蛋白 Bcl-2的表達(dá)，從而抑制了細(xì)胞色素 c的釋放及 Caspases-3活性亞基的表達(dá)，對(duì)輻射引起的脾細(xì)胞凋亡具有明顯的抑制作用。
　　本課題研究表明山荊子多酚MBP-3b作為一種抗氧化組分，能夠有效的促進(jìn)機(jī)體酶促及非酶抗氧化防御系統(tǒng)功能，抑制